Dynamikken i immunresponsen hos barn til den 23-valente pneumokokkkapselpolysakkaridvaksine (Pneumovax)

Detaljene er som beskrevet nedenfor:

1. Studiested Kilifi District Hospital.
2. Studiepopulasjon og prøvetaking Tilfeller og kontroller fra Kilifi Birth Cohort som er i live ved slutten av kohortobservasjonen (i en alder av 24 måneder) og forblir bosatt i Kilifi District vil bli vaksinert med en enkelt 0,5 ml subkutan dose på 23 valent pneumokokkpolysakkaridvaksine (Pneumovax 23) for å sammenligne dynamikken til den antikapselformede antistoffresponsen mot 5 kapselantigener valgt for å representere forskjellige immunologiske profiler av pneumokokkkapselpolysakkaridene (1, 6B, 14, 19F, 23F).

3. Rekruttering Potensielle studiepersoner vil bli identifisert og deres mødre vil bli kontaktet, informert om studien, inkludert nødvendigheten av å gjennomgå HIV-testing, og invitert til å delta. En feltarbeider vil forklare begrunnelsen og prosedyrene for studien og vil gi moren et informasjonsark/samtykkeskjema som de kan ta med seg. Mor vil også få utlevert timeseddel og billettpris for å returnere til sykehuset på avtalt dato. Avtaler vil skje i avdeling 1. Når moren kommer tilbake vil feltarbeideren gå gjennom samtykkeskjemaet på nytt og be moren signere. Moren vil bli veiledet og barnet hennes vil bli HIV-testet. Dersom deltakeren er positiv vil barnet bli henvist til Kilifi familieklinikk. Hvis deltakeren er negativ, vil barnet få enkeltdosen Pneumovax (23 valent polysakkaridvaksine). Moren vil få en tidsplan med 2 ytterligere avtaler for blodprøver, og ved hvert besøk vil prisen til og fra sykehuset bli gitt av KEMRI. Forsøkspersoner som er vaksinert og som senere ikke deltar, vil få besøk av FW på motorsykkel for å invitere dem til å holde avtaler allerede dagen etter. Det vil bli samlet inn informasjon om alder, kjønn og miljøeksponeringer som: antall eldre og yngre søsken i huset, eksponering for matrøyk, passiv sigarettrøyking, nylig innleggelse på sykehus.

   Definisjon av tilfeller:

   Tilfeller av IPD, ARI eller radiografisk lungebetennelse og hjernehinnebetennelse vil bli definert som sykdomsepisoder som krever innleggelse på sykehus, som forekommer hos kohortmedlemmer mellom fødsel og 23 måneders alder som også oppfyller minst én av følgende syndromdefinisjoner: INVASIV PNEUMOKOKK SYKDOM er definert av et positivt resultat på EN av følgende kriterier: (i) dyrking av S. pneumoniae fra et hvilket som helst normalt sterilt sted, inkludert blod, CSF, lunge, leddvæske, men unntatt mellomørevæske og utvendige øyepinner. ELLER (ii) To ganger økning i anti-PsaA-antistoffkonsentrasjon målt ved ELISA i to serumprøver oppnådd med minst 5 dagers mellomrom 21 OG tilstedeværelse i urinen av pneumokokkkapselpolysakkarid påvist ved lateksagglutinasjonsanalyse 46. ARI er definert av en akutt (<2 uker) historie med hoste eller pustevansker ledsaget av økt respirasjonsfrekvens (≥50/min hos et barn <12 måneder, ≥40/min hos et barn 12-23 måneder). ARI er alvorlig hvis det i tillegg er inntrekking av brystet, og svært alvorlig hvis det i tillegg er sentral cyanose og utmattelse eller manglende evne til å drikke 47.

   RADIOGRAFISK PNEUMONIA er definert som ARI ledsaget av radiografisk konsolidering. Alle røntgenbilder vil bli vurdert både av studieleger og av en rådgivende radiolog. "Radiografisk konsolidering" vil kun anses å være tilstede hvis dokumentert av begge observatører.

   MENINGITT: Meningitt blir definert for å målrette bruken av ytterligere diagnostiske tester for IPD. Det kreves en definisjon som er sensitiv, men ikke nødvendigvis svært spesifikk for pneumokokk-meningitt. Ethvert barn som blir overført til KEMRI høyavhengighetsenhet med en klinisk diagnose "meningitt", ethvert barn som starter på standard meningittantibiotikaregimet, eller ethvert barn med et forhøyet CSF-leukocyttall eller CSF/plasmaglukoseforhold på <0,5 vil være betraktet som et tilfelle av meningitt i denne studiens formål.

   En enkelt sykdomsepisode kan tilfredsstille én, to, tre eller alle kasusdefinisjoner. Definisjonen av IPD er til bruk i case-kontrollstudien. De andre definisjonene er til bruk i studiet av forekomst og etiologi av alvorlig ARI og radiografisk lungebetennelse og for å veilede flyten av undersøkelser av pasienter med mistenkt IPD.

4. Laboratoriemetoder ANTIKAPSULAR IGG ELISA. Metoden til Quataert et al. vil bli brukt med mindre modifikasjoner 13,14. Flatbunnede mikrotiterplater (Nunc Maxisorb, Nunc, Finland) er belagt med 20 μg/ml renset kapselpolysakkarid (American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA) i 0,01M fosfatbufret saltvann (PBS), pH 7,2, i 5 timer ved 37oC og deretter lagret ved 4oC. Platene vaskes fem ganger med PBS, pH 7,2, med 0,05 % Tween-20 etter hvert trinn. Testsera er fortynnet 1:50 i 1 % bovint serumalbumin, 0,05 % Tween-20 i PBS som inneholder 10 μg/ml C-polysakkarid (Statens Seruminstitut, København, Danmark) og 20 μg/ml polysakkarid av serotype 22F (amerikansk type C) Samling) inkubert i 30 minutter ved romtemperatur. Testsera alikvoteres på platen i duplikat i 8 tre ganger fortynninger og inkuberes ved romtemperatur i 1 time. Et standard referanseserum (89SF, Dr Carl Frasch, FDA, USA) og en kontroll (post-vaksinasjonsserum fra et individ med god respons på alle vaksineserotyper) analyseres på hver plate i syv 3 gangers fortynninger. Bundet antistoff merkes med alkalisk fosfatasekonjugert geite-anti-humant IgG i en 2 timers inkubering ved romtemperatur. Bundet enzym visualiseres med p-nitrofenylfosfat i dietanolaminsubstrat (Sigma) i 2 timer ved romtemperatur og reaksjonen stoppes med 3M NaOH. Platene leses av en ELISA-leser ved en bølgelengde på 450 nm med et referansefilter på 620 nm. Resultatene analyseres ved hjelp av et 4-parameter logistic-log curve fit program (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) og uttrykt i forhold til de kjente konsentrasjonene av referanseserumet.

   ELISA FOR ANTI-PSAA: Metoden til Tharpe et al. vil bli brukt på par eller triplikater av sera. Flatbunnede mikrotiterplater (Immunlon II HB, Dynatech Corp, Chantilly, VA) er belagt med 2,5 μg/ml renset PsaA i 0,01M fosfatbufret saltvann (PBS), pH 7,2, i 16 timer ved 4oC. PsaA produseres ved rekombinasjon og ekspresjon i Escherichia coli av genet som koder for PsaA. Platene vaskes fire ganger med PBS, pH 7,2, med 0,05 % Tween-20 etter hvert trinn bortsett fra blokkering, når platene ganske enkelt tømmes. Platene blokkeres i 1 time ved 37oC med 1 % bovint serumalbumin (EIA Grade, Sigma Chemical Co., St Louise, MO) 10 mg/L i PBS. Testsera fortynnes i 1 % bovint serumalbumin, 0,05 % Tween-20 i PBS og inkuberes i 1 time ved 37oC. Testsera analyseres i duplikat i 8 to gangers fortynninger og alle sera fra én pasient analyseres på samme plate. Et referanseserum med høy anti-PsaA-konsentrasjon og en kontroll (Sandoglobulin, Sandoz, Sveits) analyseres på hver plate i syv 2-gangers fortynninger. Bundet antistoff er merket med muse monoklonalt anti-humant IgG-Fc konjugert til pepperrotperoksidase (klon PH6043, Hybridoma Reagent laboratories, Baltimore, MD) i en 2 timers inkubering ved 37oC. Bundet enzym visualiseres med tetramethlybenzidin (TMB 1-komponent mikrobrønnperoksidasesubstrat, Kirkegaard and Perry Laboratories Inc, Gaithersburg, MD) i 30 minutter ved romtemperatur og reaksjonen stoppes med 0,18M svovelsyre. Platene leses av en ELISA-leser ved en bølgelengde på 450 nm med et referansefilter på 620 nm. Resultatene analyseres ved hjelp av et 4-parameter logistic-log curve fit program (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) og uttrykt i ELISA-enheter som en prosentandel av konsentrasjonen av referanseserumet.

5. Datalagring Rekrutterings- og oppfølgingsskjema vil bli oppbevart på et avlåst studiekontor. Informasjon fra skjemaene vil bli lagt inn på en datamaskin ved hjelp av Filemaker Pro 5.5 og vil bli koblet på studienummer og besøk med laboratoriedata.