23価の肺炎球菌莢膜多糖体ワクチン（ニューモバックス）に対する子供の免疫反応のダイナミクス

詳細は以下のとおりです。

1. 調査場所キリフィ地区病院。
2. 調査対象集団とサンプリング コホート観察の終わり (24 か月齢) に生存しており、キリフィ地区に居住しているキリフィ出生コホートの症例と対照は、23 の 0.5 ml の単回皮下投与でワクチン接種されます。価肺炎球菌多糖体ワクチン (Pneumovax 23) を使用して、肺炎球菌莢膜多糖体 (1、6B、14、19F、23F) の異なる免疫学的プロファイルを表すために選択された 5 つの莢膜抗原に対する抗莢膜抗体応答のダイナミクスを比較します。

3. 募集 潜在的な研究対象者を特定し、その母親に連絡を取り、HIV 検査を受ける必要性を含め、研究について通知し、参加するよう招待します。 フィールドワーカーが研究の根拠と手順を説明し、母親に情報シート/同意書を渡して持ち帰ります。 また、母親には予約票と予約日に病院に戻るための料金が渡されます。 予約は病棟1になります。 母親が戻ってくると、フィールドワーカーは再び同意書に目を通し、母親に署名を求めます。 母親はカウンセリングを受け、子供は HIV 検査を受けます。 参加者が陽性の場合、子供はキリフィ ファミリー クリニックに紹介されます。 参加者が陰性の場合、子供はニューモバックス (23 価多糖体ワクチン) の単回投与を受けます。 母親には、血液検査のためにさらに 2 回の予定が与えられ、各訪問時の病院への往復の料金は KEMRI によって提供されます。 ワクチン接種を受け、その後出席しない研究対象者は、オートバイで FW が訪問し、翌日に予定を守るように勧めます。 年齢、性別、および環境への曝露に関する情報が収集されます。たとえば、家にいる年長者と年少者の兄弟の数、料理の煙への曝露、受動喫煙、最近の入院などです。

   ケースの定義:

   IPD、ARI、または X 線上の肺炎および髄膜炎の症例は、以下の症候群の定義の少なくとも 1 つを満たす出生から生後 23 か月までのコホート メンバーに発生する、入院を必要とする病気のエピソードとして定義されます。 DISEASE は、次の基準のいずれかで陽性の結果が得られた場合に定義されます。 または (ii) 少なくとも 5 日間隔で得られた 2 つの血清サンプルで ELISA によって測定された抗 PsaA 抗体濃度の 2 倍の上昇 21 およびラテックス凝集アッセイによって検出された肺炎球菌莢膜多糖の尿中の存在 46。 ARI は、急性 (<2 週間) の咳または呼吸困難の病歴と、それに伴う呼吸数の上昇 (12 か月未満の小児では 50 回/分以上、12 ～ 23 か月の小児では 40 回/分以上) によって定義されます。 加えて胸部引き込みがあれば ARI は重度であり、加えて中枢性チアノーゼと衰弱または飲酒不能があれば非常に重度である 47.

   X線性肺炎は、X線像による硬化を伴うARIと定義されています。 すべての放射線写真は、治験担当医とコンサルタント放射線科医の両方によって評価されます。 両方のオブザーバーによって文書化された場合にのみ、「X 線像の硬化」が存在すると見なされます。

   髄膜炎: 髄膜炎は、IPD の追加の診断テストの使用を対象として定義されています。 感度は高いが、肺炎球菌性髄膜炎に特異的であるとは限らない定義が必要です。 「髄膜炎」の臨床診断を受けて KEMRI 高依存病棟に移送された子供、標準的な髄膜炎抗生物質レジメンを開始した子供、CSF 白血球数または CSF/血漿グルコース比が 0.5 未満の子供は、この研究の目的のために髄膜炎の症例と見なされます。

   病気の 1 つのエピソードは、1 つ、2 つ、3 つ、またはすべてのケース定義を満たす場合があります。 IPD の定義は、症例対照研究で使用するためのものです。 その他の定義は、重度の ARI および X 線検査による肺炎の発生率と病因の研究に使用し、IPD が疑われる患者の調査の流れをガイドするためのものです。

4. 検査方法 抗被膜 IGG ELISA。 Quataertらの方法。マイナーな変更 13,14 で使用されます。 平底マイクロタイタープレート（Nunc Maxisorb、Nunc、フィンランド）を、0.01Mリン酸緩衝生理食塩水（PBS）、pH 7.2中の20μg/mlの精製莢膜多糖（American Type Culture Collection、Manassas、Virginia、USA）で5時間コーティングする37oC で保存し、その後 4oC で保存します。 各段階の後、プレートをＰＢＳ、ｐＨ７．２、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０で５回洗浄する。 試験血清は、１％ウシ血清アルブミン、１０μｇ／ｍｌのＣ多糖（Ｓｔａｔｅｎｓ Ｓｅｒｕｍｉｎｓｔｉｔｕｔ、コペンハーゲン、デンマーク）および２０μｇ／ｍｌの血清型２２Ｆの多糖（アメリカンタイプカルチャーCollection) を室温で 30 分間インキュベートします。 試験血清をプレート上に 8 つの 3 倍希釈で 2 つずつ等分し、室温で 1 時間インキュベートします。 標準参照血清 (89SF、Dr Carl Frasch、FDA、米国) およびコントロール (すべてのワクチン血清型に対して良好な応答を示す個人からのワクチン接種後の血清) を、7 つの 3 倍希釈ですべてのプレートでアッセイします。 結合した抗体は、アルカリホスファターゼ結合ヤギ抗ヒト IgG で、室温で 2 時間のインキュベーションで標識されます。 結合した酵素をジエタノールアミン基質（シグマ）中のｐ－ニトロフェニルホスフェートで室温で２時間可視化し、反応を３Ｍ ＮａＯＨで停止する。 プレートは、620nmの参照フィルターを使用して450nmの波長でELISAリーダーによって読み取られます。 結果は、４パラメータロジスティック対数曲線適合プログラム（ＥＬＩＳＡ ｖ１．１１、疾病管理予防センター、ジョージア州アトランタ）によって分析され、参照血清の既知の濃度に関して表される。

   抗ＰＳＡＡのためのＥＬＩＳＡ：Ｔｈａｒｐｅらの方法。血清のペアまたはトリプリケートで使用されます。 平底マイクロタイタープレート（Ｉｍｍｕｎｌｏｎ ＩＩ ＨＢ、Ｄｙｎａｔｅｃｈ Ｃｏｒｐ、Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ、ＶＡ）を、４℃で１６時間、０．０１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．２中の２．５μｇ／ｍｌの精製ＰｓａＡでコーティングする。 PsaA は、PsaA をコードする遺伝子の大腸菌での組換えおよび発現によって生成されます。 ブロッキングを除く各段階の後、プレートを単に空にするとき、プレートを０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ、ｐＨ７．２で４回洗浄する。 ＰＢＳ中１％ウシ血清アルブミン（ＥＩＡグレード、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、ミズーリ州セントルイス）１０ｍｇ／Ｌで、プレートを３７℃で１時間ブロックする。 試験血清は、PBS 中の 1% ウシ血清アルブミン、0.05% Tween-20 で希釈し、37oC で 1 時間インキュベートします。 試験血清は、8 つの 2 倍希釈で 2 回アッセイされ、1 人の患者からのすべての血清は同じプレートでアッセイされます。 高抗ＰｓａＡ濃度の参照血清および対照（Ｓａｎｄｏｇｌｏｂｕｌｉｎ、Ｓａｎｄｏｚ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を、７つの２倍希釈ですべてのプレートでアッセイする。 結合した抗体は、ホースラディッシュ ペルオキシダーゼに結合したマウス モノクローナル抗ヒト IgG-Fc (クローン PH6043、ハイブリドーマ試薬研究所、メリーランド州ボルチモア) で 37oC で 2 時間のインキュベーションで標識されます。 結合した酵素をテトラメチルベンジジン (TMB 1-component マイクロウェル ペルオキシダーゼ基質、Kirkegaard and Perry Laboratories Inc, Gaithersburg, MD) で室温で 30 分間視覚化し、反応を 0.18M 硫酸で停止する。 プレートは、620nmの参照フィルターを使用して450nmの波長でELISAリーダーによって読み取られます。 結果は、４パラメータロジスティック対数曲線適合プログラム（ＥＬＩＳＡ ｖ１．１１、疾病管理予防センター、ジョージア州アトランタ）によって分析され、参照血清の濃度のパーセンテージとしてＥＬＩＳＡ単位で表される。

5. データの保管 募集およびフォローアップのフォームは、施錠されたスタディ オフィスに保管されます。 フォームからの情報は、Filemaker Pro 5.5 を使用してコンピューターに入力され、調査番号と訪問先の検査データにリンクされます。