Effekt av mesenkymale stromaceller på sepsis og septisk sjokk

Studiedesign og setting Studien ble utført ved Internal Medicine Intensive Care Unit (IMICU) og Anesthesiology and Reanimation Intensive Care Unit (ARICU) ved Erciyes University Hospital som er et henvisningssykehus i Sentral-Anatolia. Studien ble godkjent av Erciyes University Ethics Board (2016/114; Dato: 19.02.2016) og helsedepartementet i Tyrkia. Informert samtykke fra surrogatbeslutningstakere ble tatt for studiedeltakelse etter bekreftelse av kvalifikasjonskriterier.

Pasienter Studien var planlagt som prospektivt. I løpet av to år ble 10 pasienter med sepsis og septisk sjokk inkludert i studien fra IMICU og ARICU. Sepsis og septisk sjokk ble diagnostisert i henhold til retningslinjene for sepsis [1]. Inklusjonskriterier for denne studien var; pasienter som var mellom 18-80 år og ble innlagt på IMICU og ARICU med diagnosen sepsis og septisk sjokk. Eksklusjonskriterier ble kategorisert som pasienter som var yngre enn 18 år og eldre enn 80 år og var gravide eller ammende; pasienter som hadde terminal stadium av kreft, avansert lungesykdom som fikk oksygen hjemme, avansert pulmonal hypertensjon (WHO klasse III eller IV), avansert hjertesvikt (American Heart Association klasse III eller IV), alvorlig leversykdom (barn C) og historie av anafylaksi. Standard terapi av sepsis som foreslått i retningslinjene [1,2] ble gitt til alle pasienter og i tillegg ble MSCs behandling brukt på pasientene i studiegruppen. Kontrollpasienter diagnostisert sepsis og septisk sjokk og med lignende egenskaper for vurdering av alvorlighetsgrad av sykdom basert på APACHE II-skår og komorbide sykdommer med studiegruppen ble valgt fra IMICU- og ARICU-poster retrospektivt.

Pasientenes demografiske egenskaper, underliggende sykdommer, kliniske og laboratorieresultater ble registrert.

Kilde og anvendelse av MSC-er MSC-er ble utarbeidet i Good Manufacturing Practices (GMP) Laboratory of Genome and Stem Cell Center ved Erciyes University. Celleproduksjon og kvalitetskontrollvurderingsprosedyrer ble utført i henhold til GMP-protokoller autorisert av det tyrkiske helsedepartementet. Allogene fettavledede MSCer (ADMSCs) som ble oppnådd fra en frisk donor ble brukt på alle pasienter i studiegruppen. Fem doser ADMSCs ble påført pasientene på 1. og 3. dag (etter-tint av frosne MSCs kryopose), 5.-7. og 9. dag (ombelagte ADMSC-beholdere) av behandlingen. Hver dose av ADMSCs ble fremstilt som 1 x 106 ADMSCs/kg. Hetteglassene som inneholdt ADMSC-er ble blandet med milde bevegelser før bruk; dermed sikret det produkthomogenisering. ADMSC-er ble infundert intravenøst ​​via sentral venelinje i en fysiologisk saltoppløsning ved å bruke et blodtransfusjonssett. Pasientene ble overvåket under alle disse prosedyrene.

Tilberedning av ADMSC-er Tilstrekkelige kryokonserverte ADMSC-ampuller ble tint for å gi den nødvendige dosen for administrering. De frosne ADMSC-ene ble tint og dyrket i Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) som inneholdt 10 % humant serum, 1 % penicillin-streptomycin-løsning og 1 % stabilt glutamin (Biological Industries, Kibbutz Beit Haemek, Israel) ved 37 °C og 5 % CO2 inkubator som beskrevet før [16]. Kort fortalt ble ADMSC-er gjenvunnet og resuspendert i fysiologisk saltoppløsning og overført til pasienten med den temperaturkontrollerte posen. Morfologien til celleutseende og levedyktigheten ble vurdert ved siden av identifisering av fenotypiske egenskaper til cellene og mikrobiologiske tester. Immunfenotypingskarakterisering av ADMSC-er ble utført ved bruk av flowcytometrianalyser (Beckman Coulter, USA) med antistoffer mot CD45, CD73, CD90, CD105, CD11b, CD19, CD34, CD44 (BD Stem Flow hMSC-sett).

Cytokinanalyse Ti ml perifere venøse blodprøver ble tatt før hver MSCs infusjon ved 1., 3., 5., 7. og 9. behandlingsdag. Serumprøvene ble sentrifugert ved 5000 rpm i 5 minutter og lagret ved -80°C inntil laboratorieanalyse. Cytokinnivået ble analysert med ELISA-metoden ved å bruke Human BioSource for (TNF-, IFN-γ, IL-2, IL-4 og IL-10) sett i Robonik Read Well Touch-modell (Robonik India Pvt Ltd) enhet.

Klinisk og laboratorieoppfølging Kliniske funn og laboratorieresultater ble registrert ved administrering av MSCs infusjoner på 1., 3., 5., 7. og 9. dag. Pasientenes demografiske egenskaper, underliggende sykdommer, kliniske og laboratorieresultater ble registrert. Pasientene ble overvåket for uventede bivirkninger. I den kliniske oppfølgingen av pasientene APACHE II, ble SOFA (den sekvensielle organsviktvurderingsscore), klinisk progresjon og pasientresultat registrert. Som laboratoriefølgende, inflammatoriske markører; C-reaktivt protein (CRP), prokalsitonin (PCT) og hvite blodlegemer (WBC), blødningsparametre (blodplater, INR, fibrinogen), laktat, leverenzymer (AST, ALT), nyrefunksjoner (kreatinin) ble også registrert. Laboratorietestresultater ble analysert i henhold til MSCs administrasjonsdager. Forskjellene i laboratorietestene ble sammenlignet mellom de overlevende og ikke-overlevende pasientene i henhold til MSCs behandlingsdager.

Resultatene til pasientene ble sammenlignet med den tidligere observasjonsstudien utført på samme intensivavdelinger (ICU) som kontroll. Dødsdagen og 0-6., 7.-14. og 15-28. dag ble bestemt som overlevelsesstatus og endepunkt. Ved dødsfall ble også dato og dødsårsak registrert.

Statistisk analyse I studien ble resultatene sammenlignet med kontroller. Statistisk analyse ble utført ved bruk av Turcosa-programvare. Sammenhengene mellom kategoriske variabler ble analysert ved kjikvadratanalyse. Når parametriske forutsetninger ble gitt i sammenligning av numeriske variabler i to grupper, ble Student-T-testen brukt og Mann Whitney U-testen var i tilfelle de parametriske forutsetningene ikke ga. For analyse av gjentatte målinger; Paret Sample T-Test ble brukt for binære sammenligninger og Repeated Measures ANOVA-testen ble brukt for sammenligning av mer enn to gjentatte målinger. Overlevelsessannsynligheten for pasientene under oppfølgingsperioden ble bestemt ved Kaplan-Maier overlevelsesanalyse. Effekten av alder og APACHE II til kovariantanalyse ble justert. p <0,05 ble akseptert som statistisk signifikant.