SVF w leczeniu zwłóknienia płuc po COVID-19 (SVFCOVID-19)

Niedawna epidemia wirusa koronawiru 2 (SARS-CoV-2) szybko rozprzestrzeniła się na całym świecie, powodując globalną pandemię z niszczycielskimi konsekwencjami społeczno-gospodarczymi. Po uznaniu tej choroby przez Światową Organizację Zdrowia (WHO) za stan nadzwyczajny w zakresie zdrowia publicznego, istnieje pilna potrzeba opracowania skutecznych strategii terapeutycznych dla krytycznie chorych pacjentów z Covid-19. Ten nowy szczep wirusa powoduje złożoną chorobę o szerokim spektrum objawów, od łagodnych objawów po niewydolność wielonarządową. Wspólną cechą ciężkich przypadków jest patologicznie złożona „burza cytokin”, która objawia się nadmierną odpowiedzią immunologiczną z szybkim postępem choroby i wysoką śmiertelnością. W szczególności poważne skutki SARS CoV-2 są związane z podwyższonym poziomem białka C-reaktywnego i interleukiny-6 w płucach. Zakażenie COVID-19 może szybko przekształcić się w ciężką niewydolność oddechową wymagającą intubacji i wentylacji mechanicznej. Konieczność stosowania wentylacji mechanicznej wiąże się ze złym rokowaniem, a śmiertelność sięga 88%.

Osoby, które przebyły zapalenie płuc wywołane przez Covid-19, borykają się z następstwami choroby, które wpływają na wiele narządów. W szczególności u znacznej liczby pacjentów występują ciągłe problemy z dusznością i zmniejszonym natlenieniem, co powoduje, że wcześniej zdrowi pacjenci stają się inwalidami płuc wywołanymi wirusem. Mechanizmem tego jest intensywne bliznowacenie i zniszczenie mikrokrążenia występujące w płucach osób, które przeżyły Covid-19. Istnieje pilna potrzeba opracowania protokołów leczenia, które będą w stanie zmniejszyć stopień zwłóknienia płuc i pobudzić lokalną angiogenezę w celu lepszego wsparcia uszkodzonych pęcherzyków płucnych.

W ostatnich dziesięcioleciach mezenchymalne komórki zrębowe (MSC) okazały się potencjalnym środkiem terapeutycznym w terapiach komórkowych ze względu na korzystny wpływ na immunomodulację oraz naprawę/regenerację tkanek. Komórki te posiadają właściwości unikalnej samoodnawiania i zdolność różnicowania się w wiele linii. MSC występują w niewielkich ilościach w szpiku kostnym (BMSC) i tkance pępowiny. MSC występują także w tkance tłuszczowej (określanej jako ASC), gdzie występują jako część populacji wielokomórkowej, frakcji naczyniowej zrębu (SVF). Populacje ASC są o 500–1000 liczniejsze niż ich odpowiedniki w szpiku kostnym.

Tkanka tłuszczowa stanowi źródło frakcji naczyniowej zrębu (SVF), którą można wyizolować i przeszczepić pacjentowi podczas tego samego zabiegu chirurgicznego, w miejscu opieki. SVF jest heterogenną mieszaniną komórek progenitorowych zrębu, perycytów, komórek prekursorowych śródbłonka i makrofagów. Wykazano, że działając łącznie, SVF ma szerokie właściwości przeciwzapalne i regeneracyjne. Wykazano, że SVF jest bezpieczny po podaniu dożylnym i wykazał pewne obiecujące wyniki w przywracaniu funkcji oddechowych u pacjentów z ciężkimi chorobami płuc. Na podstawie publicznej analizy danych dotyczących sekwencjonowania RNA pojedynczych komórek (scRNA-seq), SVF wykazuje brak ekspresji ACE2, co wskazuje na jego potencjał jako fenotypu opornego na zakażenie SARS-CoV-2. W książce Podsumowując, dożylne podawanie SVF pochodzącego z tkanki tłuszczowej przedstawiono jako nowe podejście terapeutyczne mające na celu poprawę wyników klinicznych pacjentów z COVID-19 z zaburzeniami oddychania.

Wpływ kliniczny SVF na COVID-19 opiera się na 5 mechanizmach działania. Zostały one szeroko udokumentowane (patrz załączone publikacje i bibliografia).

Immunomodulacja przeciwzapalna, szczególnie przeciw zwłóknieniu T-regs. Metaloproteinazy macierzy i czynnik wzrostu wątroby. Wsparcie dla populacji komórek regeneracyjnych in situ. Badania astmy płucnej Angiogeneza w warunkach niedokrwiennych w oparciu o uwalnianie VEGF.

Terapia komórkami SVF z tkanki tłuszczowej jest korzystna, ponieważ dużą liczbę komórek można usunąć z małych objętości (30–90 cm3) za pomocą minimalnie inwazyjnej procedury liposukcji.

Wskazanie rozszerzonego dostępu

Jest to badanie o rozszerzonym dostępie, mające na celu leczenie małej grupy pacjentów z następstwami płucnymi po wyzdrowieniu z zapalenia płuc wywołanego przez Covid-19, z użyciem autologicznego SVF pochodzącego z tkanki tłuszczowej, podawanego w postaci pojedynczego wstrzyknięcia dożylnego.

Cele badań klinicznych

Głowny cel

Ocena bezpieczeństwa pojedynczego wstrzyknięcia autologicznego SVF pochodzącego z tkanki tłuszczowej, wyprodukowanego za pomocą urządzenia GID SVF-2, w leczeniu niewydolności oddechowej.

związane z Covid-19.

Cel drugorzędny

Aby ocenić skuteczność, poprzez (1) utrzymanie nasycenia SaO2 ≥ na istniejącym poziomie przy nieinwazyjnym wspomaganiu tlenem, (2) osiągnięcie redukcji poziomu wsparcia tlenem wymaganego do utrzymania SaO2 ≥ 92, poprzez dożylne wstrzyknięcie autologicznego SVF pochodzącego z tkanki tłuszczowej, wyprodukowanego przy użyciu system urządzeń GID SVF-2 do leczenia niewydolności oddechowej związanej z COVID-19.

Oczekiwany czas trwania badania klinicznego

Kontrole kontrolne po 3, 6, 9 i 12 miesiącach. Całkowity czas trwania badania wynosi 1 rok.

Protokół kliniczny

Projekt badania

Ogólny projekt badania

Jest to prospektywne, wieloośrodkowe badanie interwencyjne o rozszerzonym dostępie, obejmujące osoby chore na COVID-19. Leczeniu poddano czterdziestu (40) pacjentów z potwierdzonym zakażeniem Covid-19 i SaO2 ≤ 92. Pacjenci otrzymali dożylny zastrzyk autologicznego SVF pochodzącego z tkanki tłuszczowej. Pacjenci będą obserwowani przez 6 tygodni.

Procedury badawcze

Procedury wykrywania

Wstępnej oceny dokonano w lokalnym Centro de Salud. Następnie pacjentów kierowano do HEODRA lub HECAM w celu potwierdzenia diagnozy i dodatkowych badań.

Leki towarzyszące

Akceptowane są wszystkie towarzyszące leki uznawane za standardowe leczenie. Podczas każdej wizyty kontrolnej pacjenta zostanie wypełniony formularz zgłoszenia przypadku jednoczesnego leczenia.

Podsumowanie leczenia w ramach badania

40 nierandomizowanych pacjentów będzie leczonych autologicznym SVF. Minimalna dawka: 45x106 ± 5x106 komórek Plan leczenia: pojedyncza interwencja

Próbki surowicy kontrolnej (20 ml) – czynniki zapalne: 1 miesiąc, 3 miesiące, 6 miesięcy PFT + DLco: przed operacją, 1 miesiąc, 3 miesiące, 6 miesięcy, tygodnie i 12 miesięcy CT: przed operacją, 3 miesiące, 6 miesięcy, 12 miesięcy Kwestionariusz jakości życia SF-36 SF-36 (Medical Outcomes Trust): przedoperacyjny, 12 miesięcy Kwestionariusz oddechowy SGRQ-C SGRQ-C (St. George's University): okres przedoperacyjny, 12 miesięcy

Tkanka tłuszczowa pacjenta zostanie pobrana poprzez liposukcję brzucha lub boków i umieszczona bezpośrednio w urządzeniu GID SVF-2. Zebrana tkanka tłuszczowa będzie trawiona enzymatycznie w tym samym urządzeniu GID SVF-2 przy użyciu enzymu GIDZyme-2-70 i odwirowana w tym samym urządzeniu GID SVF-2 w celu zagęszczenia komórek SVF. Komórki SVF zostaną usunięte, a aktywna dawka terapeutyczna wynosząca 45 x 106 (±5 x 106) komórek SVF zostanie wstrzyknięta do 100 ml worka dożylnego zawierającego LR. Płyny będą podawane przez cewnik dożylny przez filtr krwi przez 10 minut.

Dawkowanie

Przygotowanie dawki

Używając licznika komórek LunaStem® Nucleocounter i współczynnika rozcieńczenia 100, oblicz potrzebną objętość, korzystając z poniższego równania i przenieś tę ilość zawiesiny do strzykawki o pojemności 10 ml.

#ml = dawka = 40 x 106 (+/- 5x106)

Podawanie dawki Sposób podawania SVF do stosowania naczyniowego jest taki sam, niezależnie od tego, czy jest to podawanie dożylne (IV), czy dożylne (IA).

Leczenie przeprowadzono dożylnie za pomocą cewnika dożylnego z filtrem krwi.

Dodać dawkę do 100 ml worka LR ogrzanego do 37°C i dobrze wymieszać. Podawać 100 ml w ciągu 10 minut.

Przestrzeganie leczenia

Przed podpisaniem świadomej zgody każdy uczestnik miał czas na zapoznanie się z formularzem zgody i zadanie pytań na temat badania. Uczestnicy powinni skontaktować się z lekarzem lub personelem, jeśli uczestnik ma jakiekolwiek wątpliwości w trakcie badania. Podkreślone zostanie, że osoba badana musi przestrzegać protokołu i szczerze mówić o swoich objawach.

Wycofanie podmiotów z powodu niezgodności

Uczestnicy mogą zostać wykluczeni z badania według uznania głównego badacza wyłącznie z powodów związanych z egzaminami w ramach badania, które mogłyby zagrozić zdrowiu i/lub dobru uczestnika, gdyby uczestnicy mieli kontynuować udział w badaniu. Uczestnicy mogą dobrowolnie wycofać się z badania w dowolnym momencie bez żadnych uprzedzeń.

• Wycofani uczestnicy nie zostaną zastąpieni, jeśli uczestnik otrzymał leczenie objęte badaniem.

Harmonogram wizyt studyjnych

Wstępna ocena i świadoma zgoda miały miejsce w szpitalach. Przed leczeniem pacjentów oceniano w celu ustalenia, czy spełniają kryteria włączenia/wyłączenia. Jeśli nie zostały jeszcze dostarczone, zebrano dane demograficzne, historię medyczną, jednocześnie stosowane leki, SaO2 i gazometrię krwi tętniczej. Pacjenci zostali włączeni, jeśli spełnili wszystkie kryteria kwalifikacyjne i podpisali Świadomą Zgodę.

Czas pomiędzy włączeniem do badania a leczeniem nie przekraczał 48 godzin.

W dniu leczenia każdego pacjenta poddano ponownej ocenie pod kątem włączenia do badania.