Monitorowanie toczniowego zapalenia nerek przez zewnątrzkomórkowe pęcherzyki moczowe

Wstęp: Toczniowe zapalenie nerek (LN) jest ciężkim objawem tocznia rumieniowatego układowego (SLE), który może prowadzić do nieodwracalnego uszkodzenia nerek, jeśli nie zostanie szybko wykryty i leczony. LN klasyfikuje się na podstawie cech histopatologicznych. Klasyfikacja pomaga w określeniu ciężkości i odpowiednich strategii leczenia choroby oraz wykluczeniu innych schorzeń, które mogą naśladować obraz kliniczny LN. Najczęściej stosowanym systemem klasyfikacji jest klasyfikacja Międzynarodowego Towarzystwa Nefrologii/Towarzystwa Patologii Nerek (ISN/RPS), która dzieli toczniowe zapalenie nerek na sześć klas: I) Minimalna zmiana, II) Mezangial Proliferative LN, III) Focal Proliferative LN, IV) Rozproszone proliferacyjne LN, V) Błonowe LN, VI) Zaawansowane stwardniające LN2. Klasyfikacja wymaga inwazyjnych biopsji nerek, które są trudno dostępne i wiążą się z potencjalnymi powikłaniami i dyskomfortem pacjenta. Ponadto biopsje nerki obejmują jedynie niewielką część nerki. Ostatnie badania sugerują, że zewnątrzkomórkowe pęcherzyki moczowe (uEV) są potencjalnymi nieinwazyjnymi biomarkerami chorób nerek, w tym LN4. uEVS to małe nanopęcherzyki zewnątrzkomórkowe pochodzenia endosomalnego, które są wydzielane do moczu w wyniku fuzji ciał wielopęcherzykowych z błoną plazmatyczną. Zatem mogą stanowić obiecującą biopsję płynną, która odzwierciedla wzór i/lub nasilenie uszkodzenia histologicznego nerek.

Hipoteza: Głównym celem tego prospektywnego badania jest zbadanie użyteczności egzosomów moczu jako nieinwazyjnego biomarkera do monitorowania aktywności i postępu toczniowego zapalenia nerek u pacjentów z SLE.

Metody: Pacjenci z SLE, spełniający kryteria klasyfikacji EULAR/ACR 2019, kierowani na biopsję nerki, będą rekrutowani z Kliniki Reumatologii i Nefrologii Szpitala Uniwersyteckiego w Odense. Od każdego pacjenta zostaną zebrane szczegółowe dane demograficzne i kliniczne, w tym wiek, płeć, pochodzenie etniczne, rodzaj medycyny, czas trwania aktywności SLE, uszkodzenie SLE i wyniki badań laboratoryjnych. Aktywność SLE w czasie biopsji będzie oceniana przy użyciu wskaźnika aktywności choroby SLE 2000 (SLEDAI-2K). Uszkodzenia SLE zostaną ocenione zgodnie ze wskaźnikiem uszkodzeń SLICC. Zostaną pobrane próbki moczu, dodane inhibitory proteazy i zamrożone w temperaturze -80 stopni. UEV zostaną wyizolowane za pomocą wytrącania glikolem polietylenowym (PEG), zostanie określone stężenie uEV i uzyskany zostanie dostęp do białka za pomocą metody Western blot i/lub PCR. Wyizolowane zostaną uEV specyficzne dla kłębuszków, a opracowane wcześniej testy zostaną zastosowane w celu wykrycia kompleksu atakującego błonę (MAC)/kompleks C5b-95. UEV z osocza/surowicy zostaną wyizolowane w celu sprawdzenia korelacji z uEV. Biopsje nerek zostaną poddane analizie histologicznej na oddziale patologii przez doświadczonych nefropatologów, zgodnie z obowiązującymi wytycznymi klinicznymi. Różnice w ładunku uEV pomiędzy pacjentami z SLE z toczniowym zapaleniem nerek i bez toczniowego zapalenia nerek zostaną przeanalizowane przy użyciu odpowiednich testów statystycznych. Korelacje między biomarkerami egzosomalnymi, różnicami histologicznymi w biopsji nerki i aktywnością choroby zostaną ocenione za pomocą analizy korelacji Pearsona.

Perspektywa: To prospektywne badanie ma na celu ustalenie egzosomów moczu jako potencjalnych nieinwazyjnych biomarkerów do monitorowania toczniowego zapalenia nerek u pacjentów z SLE. Wyniki tych badań mogą doprowadzić do opracowania bardziej skutecznych i przyjaznych dla pacjenta podejść do leczenia LN, umożliwiając wczesne podjęcie interwencji i poprawę wyników leczenia nerek u pacjentów z SLE.