Изучение онкогенов, кодируемых малыми ДНК-вирусами, в вирусном канцерогенезе с использованием лабораторных модельных систем

Предметы изучения:

1. Критерии включения:

   • Возраст: 18 - 65 лет.
   • Женщины с положительным результатом на ВПЧ, диагностированные при обычном скрининге. Женщины, желающие принять участие в исследовании и подписавшие информированное согласие

2. Критерий исключения:

   • Возрастные ограничения (младше 18 лет или старше 65 лет).
   • Пациенты с ослабленным иммунитетом, пациенты, получающие стероидную или химиотерапию, или пациенты с серьезными заболеваниями, которые могут повлиять на их иммунную систему.
   • Неизвестная история болезни.

   Учебные группы:

   • Группа 1 (случаи): пациенты с раком шейки матки любой степени злокачественности (диагностированные в ходе обычного скрининга или любых других диагностических тестов)
   • Группа 2 (контрольная): женщины, имеющие одинаковые критерии включения и исключения, но не имеющие рака шейки матки.

   Цель исследования:

   1. Изучение роли ВПЧ на примере малых ДНК-вирусов в трансформации клеток и канцерогенезе.
   2. Определение большинства генотипов ВПЧ, связанных с высоким риском возникновения рака шейки матки.
   3. Обнаружение онкогенов ВПЧ, играющих роль в клеточной трансформации и малигнизации.

   4. Изучение роли интеграции вирусной ДНК в клеточной трансформации и канцерогенезе.

      Методы исследования:

      Сбор и хранение образцов:

      • Образцы берутся из шейки матки щеткой или тампоном, следуя инструкциям, соответствующим типу устройства для сбора.

      • Пробирки для сбора должны храниться при комнатной температуре (15–30 °C).

      • Образцы будут отправлены в лабораторию менее чем через 14 дней после сбора.
      • Пробирки можно хранить 2-3 недели при комнатной температуре.

      Обнаружение ВПЧ:

      • ВПЧ не может размножаться в культуре ткани, поэтому в большинстве случаев его точная идентификация зависит от методов молекулярной биологии, таких как полимеразная цепная реакция (ПЦР).

      Генотипирование ВПЧ:

      • ПЦР-ПДРФ демонстрирует хорошую дискриминационную способность, дифференцируя генотипы HR и LR ВПЧ, и позволяет идентифицировать единичные или множественные инфекции.

      • В этом методе амплифицированная ДНК расщепляется ферментами рестрикции, в результате чего образуются фрагменты ДНК различной длины. Длина каждого фрагмента характерна для определенного генотипа ВПЧ.

      • Наиболее распространенными ферментами рестрикции являются BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI и RsaI.

      Онкогены ВПЧ и онкопротеины:

      • Основными методами, используемыми для обнаружения мРНК онкогенов E6/E7, являются два коммерческих анализа: PreTectW Proofer и APTIMAW HPV Assay. Эти методы основаны на опосредованной транскрипцией амплификации полноразмерных транскриптов E6/E7 с использованием ПЦР.

      Статистический анализ:

      • Данные будут проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа с использованием программного обеспечения SPSS версии 24.0. Значения будут выражены как среднее значение ± стандартное отклонение. Для сравнения между двумя группами будет использоваться t-критерий Стьюдента, чтобы определить, значительно ли случаи отличались от контроля. Различия будут считаться статистически значимыми при P<0,05, в то время как P<0,01 будет представлять более значимое изменение.