使用实验室模型系统研究病毒致癌作用中小 DNA 病毒编码的致癌基因

学习科目：

1. 纳入标准：

   • 年龄：18-65岁。
   • 经常规筛查诊断为 HPV 阳性的女性。 愿意参加研究并签署知情同意书的女性

2. 排除标准：

   • 极端年龄（小于 18 岁或大于 65 岁）。
   • 免疫力低下的患者、接受类固醇治疗或化疗的患者，或患有可能影响其免疫系统的严重疾病的患者。
   • 病史不详。

   学习小组：

   • 第 1 组（病例）：已知患有任何程度恶性肿瘤的宫颈癌患者（通过常规筛查或任何其他诊断测试诊断）
   • 第 2 组（对照组）：具有相同纳入和排除标准的女性，但不知道患有宫颈癌

   研究目的：

   1. 以 HPV 为例研究细胞转化和癌变中的小 DNA 病毒的作用。
   2. 确定与宫颈癌发生高风险相关的大多数 HPV 基因型。
   3. 检测在细胞转化和恶性肿瘤中发挥作用的 HPV 致癌基因。

   4. 研究病毒 DNA 整合在细胞转化和致癌作用中的作用。

      学习方法：

      样品采集和储存：

      • 按照与采集设备类型对应的说明，用刷子或拭子从子宫颈采集样本。

      • 收集管将在室温（15-30 °C）下储存。

      • 样本将在采集后 14 天内送至实验室
      • 试管可在室温下保存 2-3 周。

      HPV检测：

      • HPV 不能在组织培养中繁殖，因此，在大多数情况下，其准确鉴定依赖于分子生物学技术，例如聚合酶链反应 (PCR)。

      HPV基因分型：

      • PCR-RFLP 通过区分HR 和LR HPV 基因型显示出良好的区分能力，并且可以识别单一或多重感染。

      • 在该技术中，扩增的DNA 被限制酶消化，产生不同长度的DNA 片段。 每个片段长度都是特定 HPV 基因型的特征。

      • 最常见的限制酶是BamHI、Dd6eI、HaeIII、HinfI、PstI 和RsaI。

      HPV 癌基因和癌蛋白：

      • 用于检测E6/E7 致癌基因mRNA 的主要技术是两种商业化验：PreTectW Proofer 和APTIMAW HPV 化验。 这些技术基于使用 PCR 对全长 E6/E7 转录物进行转录介导的扩增。

      统计分析：

      • 将使用SPSS 软件24.0 版通过单向方差分析来分析数据。 值将表示为平均值 ± S.D. 对于两组之间的比较，将使用学生 t 检验来确定病例是否与对照有显着差异。 当 P<0.05 时，差异将被视为具有统计学意义，而 P<0.01 将代表更显着的变化。