Badania onkogenów kodowanych przez wirusa małego DNA w karcynogenezie wirusowej przy użyciu laboratoryjnych systemów modelowych

Przedmioty studiów:

1. Kryteria przyjęcia:

   • Wiek: 18 - 65 lat.
   • Kobiety, u których wykryto HPV w wyniku rutynowego badania przesiewowego. Kobiety chętne do wzięcia udziału w badaniu i podpisania świadomej zgody

2. Kryteria wyłączenia:

   • Krańce wiekowe (mniej niż 18 lat lub więcej niż 65 lat).
   • Pacjenci z obniżoną odpornością, pacjenci poddawani terapii sterydowej lub chemioterapii lub pacjenci z poważnymi chorobami, które mogą wpływać na ich układ odpornościowy.
   • Nieznana historia medyczna.

   Grupy badawcze:

   • Grupa 1 (przypadki): pacjentki z rakiem szyjki macicy o dowolnym stopniu złośliwości (zdiagnozowane na podstawie rutynowych badań przesiewowych lub innych testów diagnostycznych)
   • Grupa 2 (kontrola): Kobiety spełniające te same kryteria włączenia i wyłączenia, ale nie wiadomo, czy mają raka szyjki macicy

   Cel badania:

   1. Badanie roli HPV jako przykładu małych wirusów DNA w transformacji komórek i karcynogenezie.
   2. Określenie większości genotypów HPV związanych z wysokim ryzykiem wystąpienia raka szyjki macicy.
   3. Wykrywanie onkogenów HPV odgrywających rolę w transformacji i złośliwości komórek.

   4. Badanie roli integracji wirusowego DNA w transformacji komórkowej i karcynogenezie.

      Metody nauki:

      Pobieranie i przechowywanie próbek:

      • Próbki zostaną pobrane z szyjki macicy za pomocą szczoteczki lub wacika\ zgodnie z instrukcjami dotyczącymi rodzaju urządzenia do pobierania.

      • Probówki do pobierania będą przechowywane w temperaturze pokojowej (15-30 °C).

      • Próbki zostaną wysłane do laboratorium w ciągu mniej niż 14 dni od pobrania
      • Rurki można przechowywać przez 2-3 tygodnie w temperaturze pokojowej.

      Wykrywanie wirusa HPV:

      • Wirus HPV nie może namnażać się w hodowli tkankowej, dlatego w większości przypadków jego dokładna identyfikacja opiera się na technikach biologii molekularnej, takich jak reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR).

      Genotypowanie HPV:

      • PCR-RFLP wykazuje dobrą moc dyskryminacyjną poprzez różnicowanie genotypów HR i LR HPV i umożliwia identyfikację pojedynczej lub wielokrotnej infekcji.

      • W tej technice zamplifikowany DNA jest trawiony przez enzymy restrykcyjne, w wyniku czego powstają fragmenty DNA o różnej długości. Każda długość fragmentu jest charakterystyczna dla określonego genotypu HPV.

      • Najczęstszymi enzymami restrykcyjnymi są BamHI, Dd6eI, HaeIII, HinfI, PstI i RsaI.

      Onkogeny i onkoproteiny HPV:

      • Główne techniki stosowane do wykrywania mRNA dla onkogenów E6/E7 to dwa dostępne na rynku testy: PreTectW Proofer i APTIMAW HPV Assay. Techniki te opierają się na amplifikacji za pośrednictwem transkrypcji pełnej długości transkryptów E6/E7 przy użyciu PCR.

      Analiza statystyczna:

      • Dane zostaną przeanalizowane za pomocą jednokierunkowej analizy wariancji przy użyciu oprogramowania SPSS w wersji 24.0. Wartości zostaną wyrażone jako średnia ± S.D. Do porównania między 2 grupami zostanie zastosowany test t-Studenta w celu określenia, czy przypadki istotnie różniły się od kontroli. Różnice będą uważane za statystycznie istotne przy P <0,05, podczas gdy P <0,01 będzie reprezentować bardziej znaczącą zmianę.