ADA SNP 在复发性多发性硬化症 (RMS) 受试者中的作用

多发性硬化症 (MS) 的治疗前景正在迅速发展。 在过去的 25 年里，新的免疫调节药物的加入速度加快。 MS 免疫疗法也可以以不同的方式分类，分为连续给予的治疗（慢性治疗）和间歇性应用的药物治疗（免疫重建疗法 [IRT]）。 后者背后的原理是耗尽免疫系统，使其能够自我重建。 根据定义，IRT 是在短期间歇性课程中进行的，而不是连续进行的。 IRT 模式显示可诱导 MS 的长期缓解，在某些情况下，这接近于“治愈”的定义。

最重要的是，使用这些方式的 IRT 会在重建阶段后导致淋巴细胞库发生重大变化。

克拉屈滨 (2-CdA) 尤其如此，这是一种选择性耗尽外周淋巴细胞的高效疗法，最近被欧洲医药机构批准用于具有高疾病活动性的 RMS 患者。

与其他细胞类型相比，淋巴细胞具有较高的 DCK 与 5'-NT 细胞内比率。 具体而言，DCK 水平和 DCK 与 5'-NT 的比率在 T 细胞（CD4+ 和 CD8+）、B 细胞和树突状细胞中很高，但在许多非血液细胞类型中非常低（http://biogps. gnf.org）。 这使得淋巴细胞，主要是记忆 B 细胞，对 2-CdA 核苷酸的积累特别敏感。 2-CdATP 的细胞内积累导致 2-CdATP 掺入细胞 DNA，破坏双螺旋结构并导致 DNA 修复和合成失败。 由此产生的 DNA 链断裂改变细胞周期进程，诱导由细胞凋亡介导的细胞死亡。 虽然细胞凋亡是 2-CdA 最主要的作用机制，但不能排除其他机制。 许多证据表明，核苷酸信号控制着免疫中一些最重要的反应，范围从抗原驱动的 T 淋巴细胞增殖到 T 辅助细胞 1 (Th1) 和 Th2 细胞分化，从中性粒细胞和巨噬细胞趋化性到细胞内病原体杀伤，以及 NADPH-氧化酶激活导致 IL-1β 成熟和释放。 此外，对克拉屈滨关键 III 期试验中收集的淋巴细胞亚群的分析表明，虽然 T 细胞减少显示出一定的克拉屈滨剂量依赖性，但 B 细胞在试验中的两种给药方案下都有类似的减少。 此外，T 细胞和 B 细胞的平均数量在没有复发的患者和发展为复发的患者之间没有差异，这表明克拉屈滨的疗效并不严格依赖于淋巴细胞计数的减少。 另一方面，较低的淋巴细胞计数与较高的带状疱疹感染风险相关，所有事件均受限且为皮节性事件，其中大多数事件分级为轻度或中度。 因此，严重的淋巴细胞减少症也是一个重要的安全风险。 在 III 期临床试验 (RCT) 中，接受 3.5mg/kg 口服 2-CdA 治疗的受试者中有 20-25% 出现了短暂的 3-4 级淋巴细胞减少症。 在 CLARITY 研究的扩展阶段结束时接受最大累积剂量 2-CdA (CC 8.75 mg/kg) 的组中因淋巴细胞减少而停止治疗的患者比例最高 (12.4%) (22) . 这种效应在其他疾病中也与淋巴细胞中 DCK mRNA 水平降低和 5'NT mRNA 水平升高相关。 尽管 2-CdA 的生物激活需要独立于 ADA 作用的 DCK 功能，但不能排除 ADA 参与 2-CdA 作用机制的其他方面，考虑到 ADA 在淋巴细胞激活和功能中的关键作用。

与此相一致，最近通过筛选 MS 中的 50 多个 SNP，确定了与脑部炎症和 MS 疾病严重程度相关的 ADA 遗传变异（rs244072，非风险/风险等位基因：T/C）（文章准备中） - 514 名 MS 患者的相关基因，并寻找与临床和生化参数的关联。 观察到的最引人注目的结果是至少一个风险等位基因的存在与 EDSS 评分之间存在直接相关性，即 CT/CC 患者的 EDSS 值高于 TT 患者 (p=0.016)。

因此，我们假设发现与 MS 疾病严重程度相关的 ADA 基因的遗传多态性也可以影响 2-CdA 在药物敏感性/耐药性以及副作用（如淋巴细胞减少症）方面的反应。 根据基本原理，在 MRS 患者当前可用的治疗选择的全景中，克拉屈滨是唯一具有干扰 ADA 作用机制的免疫重建疗法，为此已选择克拉屈滨作为本研究的临床实践中的参考治疗。

根据临床实践接受克拉屈滨治疗并在基线前长达 -3 个月（第 0 个月）的基线前筛选期间满足 SmPc 要求的候选受试者将在第 1 周和第 5 周（第 1 周）接受初始治疗课程-W5) 根据临床实践。

在第 1 年开始使用克拉屈滨之前、第 2 年开始使用克拉屈滨之前以及每个治疗年开始治疗后 2 个月和 6 个月，受试者将按照强制性监测进行血样访问。

根据 MS 受试者监测的临床实践，每个受试者的研究将持续 2 年，提供五次访问：筛选、第 0 个月、第 6 个月、第 12 个月和第 24 个月。

该研究的主要目的是评估 ADA SNP rs244072（非风险/风险等位基因：T/C）对克拉屈滨 (2-CdA) 在复发性多发性硬化症 (RMS) 患者的现实环境中诱导的淋巴细胞减少症的影响).

次要目标是：

• 评估克拉屈滨作用方式中涉及的分子、代谢和免疫学因素，这些因素会影响患者对治疗的反应，尤其是淋巴细胞减少症；
• 收集接受克拉屈滨治疗的 RMS 患者的安全性和耐受性数据；
• 评估克拉屈滨对残疾进展和复发率的影响。

该研究将包括收集血液样本以调查主要和次要终点。 对于这些分析，将在第 0 个月、第 6 个月、第 12 个月和第 24 个月收集最多 60 毫升的血液。

定量变量将报告为均值和标准差 (SD) 或中位数和四分位距 (Q1-Q3)，分类变量将报告为数量 (n) 和百分比 (%) 将对所有样本评估主要终点和临床终点. 除非另有说明，否则其他次要终点将对每个中心的患者进行评估。

T学生检验或曼惠特尼检验将用于比较两组的基线特征（与ADA的遗传多态性相关），卡方检验o Fisher精确检验必要时将用于分类变量。 Shapiro Wilk 测试和图形方法将用于评估正态性假设。

在主要终点分析中，将使用配对 t 检验分别评估每组淋巴细胞的变化。 线性混合模型将用于比较两组的变化，同时考虑每个患者（患者作为随机效应）组的重复数据，时间和每个时间的组作为固定效应。 将检查模型假设，以防它们不支持对数数据或将使用其他模型。

不同的混合模型将用于评估一段时间内所有样本的临床终点。

p 值 < 0.05 具有统计学意义。