Účinek n-3 polynenasycených mastných kyselin u pacientů s psoriatickou artritidou

Metoda Návrh studie: Studie byla navržena jako randomizovaná, dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná, multicentrická studie. Pacienti byli náhodně rozděleni do bloků po pěti pomocí počítačem generované blokové sekvence. Po dobu 24 týdnů byli pacienti zařazeni do denního příjmu 6 kapslí obsahujících buď 3 g n-3 PUFA (50 % EPA a 50 % DHA) z kapslí s rybím olejem nebo 3 g olivového oleje (přibližně 80 % kyseliny olejové a 20 % kyselina linolová). Všichni vyšetřovatelé, pacienti a výzkumní pracovníci byli zaslepení vůči kódům suplementace. Pacienti byli požádáni, aby během celé studie dodržovali obvyklou dietu. Studie byla provedena v souladu s Helsinskou deklarací a správnou klinickou praxí (GCP).

Subjekty: Pacienti s PsA definovaným Klasifikačními kritérii pro psoriatickou artritidu (CASPAR) (25) byli zařazeni z revmatologického oddělení, Aalborg University Hospital a Department of Rheumatology, Vendsyssel Hospital, v Dánsku. Kritéria pro zařazení byla PsA u dospělých nad 18 let s jakoukoli aktivitou onemocnění, zatímco vylučovacími kritérii byly dokumentované srdeční arytmie, léčba biologickými léky nebo léčba perorálními kortikosteroidy.

Shoda byla hodnocena počítáním kapslí během poslední návštěvy. Pacienti byli definováni jako nevyhovující, pokud bylo vráceno > 150 tobolek a tito pacienti nebyli zahrnuti do analýzy podle protokolu.

Všichni účastníci dali svůj písemný informovaný souhlas a regionální etická komise Severního regionu Dánska studii schválila.

Klinické hodnocení: Pacienti byli hodnoceni na začátku, po 12 týdnech suplementace a po 24 týdnech. Na začátku byla získána doba trvání onemocnění, anamnéza, kuřácké návyky a dieta. Byla hodnocena anamnéza diabetu mellitu, hypertenze a dyslipidémie a byla definována jako přítomné, pokud pacient dostával dietní nebo léčebnou léčbu tohoto stavu. Ke zhodnocení konzumace ryb u pacientů při obědě a večeři byl použit potravinový dotazník. Skóre pro příjem ryb bylo dáno následujícím způsobem: nikdy nejezte ryby = 1; jíst ryby jednou za měsíc =2; jíst ryby dvakrát až třikrát za měsíc = 3; jíst ryby jednou týdně = 4; jíst ryby dvakrát až třikrát týdně = 5; a jíst ryby alespoň jednou denně = 6.

Při každé návštěvě byly u všech pacientů hodnoceny konvenční kardiovaskulární rizikové faktory, jako jsou kuřácké návyky, krevní tlak, index tělesné hmotnosti (BMI) a poměr pasu k bokům (WHR). Kromě toho bylo provedeno klinické hodnocení, které se skládalo z počtu 68 citlivých kloubů, 66 oteklých kloubů, skóre aktivity onemocnění (DAS) a postižení psoriatické oblasti kůže (PASI).

Krevní vzorky: Krevní vzorky byly odebírány ráno bez lačnění pro posouzení složení mastných kyselin granulocytů a rutinní laboratorní vyšetření. Granulocyty byly izolovány z plné krve a lipidy byly extrahovány a mastné kyseliny esterifikovány, jak bylo popsáno dříve (26). Složení mastných kyselin v granulocytech bylo stanoveno plynovou chromatografií na plynovém chromatografu Chrompack CP-9002 (Varian, Middelberg, Nizozemí) a vyjádřeno jako hmotnostní procenta (hmotn. % celkových mastných kyselin.

HRV: Pětiminutové záznamy HRV byly získány pomocí technologie SphygmoCor (SphygmoCor, verze softwaru 8.2; AtCor Medical, Sydney, NSW, Austrálie).

HRV byla zaznamenána u každého pacienta podle současných doporučení (27). Měření byla získána v ranních hodinách po 15 minutovém odpočinku v místnosti s konstantní teplotou 20 °C. Pacienti byli poučeni, aby nekouřili a vyhýbali se alkoholu a nápojům obsahujícím kofein do 12 hodin před vyšetřením. Tyto analýzy provedl vyškolený technik zaslepený k typu doplňku. Pacienti byli uloženi v poloze na zádech (v klidu) na 10 minut, dýchali spontánně bez mluvení. HRV byly analyzovány v časové doméně a byly použity následující proměnné:

• RR: průměr všech normálních intervalů RR během 5minutového záznamu
• SDNN: standardní odchylka všech normálních intervalů RR v 5minutovém záznamu
• SDNNindex: průměr standardní odchylky všech normálních RR intervalů.
• pNN50: procento po sobě jdoucích rozdílů RR-intervalů > 50 ms
• RMSSD: druhá odmocnina ze součtu druhých mocnin rozdílů mezi sousedními intervaly

PWV: Analýza PWV a pulzních vln byla provedena neinvazivně systémem Sphygmocor (AtCor Medical, Sydney, NSW, Austrálie), jak bylo popsáno dříve (28) a podle mezinárodních doporučení (29). Všechna měření byla provedena v duplikátech jediným vyškoleným operátorem a při analýze byl použit průměr těchto dvou hodnot.

Karotická radiální a karotická femorální PVW byla měřena pomocí arteriální tonometrie. Všechna měření byla provedena na pravých bočních končetinách. Povrchová vzdálenost byla měřena páskou jako přímka od suprasternálního zářezu ke karotidové lokalizaci (proximální pulz) a odečetla se vzdálenost od suprasternálního zářezu k radiální nebo femorální lokalizaci (distální pulz) (30,31). Doba průchodu tlakovou vlnou byla stanovena jako doba mezi R-vlnou EKG a proximálním pulzem odečtená od času mezi R-vlnou EKG a distálním pulzem. PWV byla následně vypočtena vydělením povrchové vzdálenosti dobou průchodu tlakové vlny.

Centrální TK byl odhadnut pomocí zařízení SphygmoCor®. Po 10 minutách klidu v poloze na zádech byl třikrát měřen pažní TK ve 2minutových intervalech na levé paži automatickým zařízením Microlife® a poslední měření bylo provedeno jako reprezentativní pro TK pažní tepny. Dále byly odebrány vzorky tlakových křivek radiální tepny pravé paže. Pomocí validované generalizované přenosové funkce byl odhadnut centrální TK pomocí brachiálního systolického a diastolického TK [32,33]. Index augmentace aorty (AIx) byl standardizován na srdeční frekvenci 75 tepů za minutu, aby se minimalizoval účinek srdeční frekvence. Pouze měření s T1 (doba do počátečního vzestupu tlakové vlny) >80 a <150 ms a augmentačním indexem (AI, rozdíl mezi prvním a druhým vrcholem tvaru arteriální vlny jako procento pulzního tlaku) <50 % a operátor index (libovolné číslo mezi 1 a 100 popisující kvalitu odvozené pulzní vlny) >80 byly přijaty podle doporučení (web AtCor Medical®).

Statistická analýza Všechny statistické analýzy byly provedeny pomocí STATA verze13 (StataCorp LP, TX, US). Předpokládali jsme, že intervence s n-3 PUFA by zvýšila parametr HRV RR o 0,5 směrodatné odchylky (SD).

Abychom toho dosáhli při p<0,05 a 1-β = 0,80, potřebovali jsme velikost vzorku s 63 subjekty v každé skupině.

Rozdíl v kontinuálních výsledcích mezi výchozí hodnotou a 24 týdny po randomizaci byl porovnán mezi dvěma léčebnými skupinami v jednostranné analýze rozptylu (ANOVA). Rovnost rozptylů mezi léčebnými skupinami byla hodnocena pomocí Bartlettova testu. Vzhledem k možnosti zkreslení po náhodném přidělení léčby byla provedena analýza kovariance (ANCOVA). Před touto analýzou byla provedena kontrola kolinearity mezi kovariátami a model byl odpovídajícím způsobem upraven. V tomto modelu byla rovnost rozptylů hodnocena pomocí Leveneova testu.

Celkový počet parametrů v modelech byl při specifikaci modelů omezen na jednu desetinu počtu účastníků studie nebo počtu každé kategorie.

Všechny analýzy byly provedeny jako analýzy záměrné léčby (žádný z pacientů není vyloučen a pacienti jsou analyzováni podle randomizačního schématu) a analýzy podle protokolu (pacienti, kteří dokončí celou klinickou studii podle protokolu). Analýzy byly kontrolovány z hlediska věku, pohlaví, kouření, přítomnosti a nepřítomnosti diabetes mellitus, hypertenze a hypercholesterolemie, užívání nesteroidních protizánětlivých léků (NSAID) a skóre aktivity onemocnění.

Rozdíly byly považovány za významné s p-hodnotou <0,05 (dvoustranné).