Účinnost jednokrokových kultivačních médií a sekvenčních kultivačních médií na rychlost blastulace

Sekvenční kultivační média jsou navržena tak, aby napodobovala měnící se prostředí ve vývodech vaječníků a děloze in vivo. Existují však určité rozdíly mezi kultivačními podmínkami in vivo a in vitro. Proto jsou vytvořena jednokroková média, která umožňují embryu samotnému vybrat si potřebné živiny při zachování stabilnějšího kultivačního prostředí. Předchozí studie naznačují vyšší rychlost blastulace v jednokrokovém médiu než v sekvenčním médiu.

Toto je randomizovaná kontrolovaná studie (RCT) srovnávající rychlost blastulace jednokrokových kultivačních médií a sekvenčních kultivačních médií. Stimulační protokol je antagonistický. Pacient bude konzultován v den ultrazvuku, pokud splní kritéria pro zařazení a podepíše formulář souhlasu. Poté sestra otevře dopis obsahující typ média pro daný případ. Médium se připravuje v laboratoři den před odběrem oocytů.

Po odběru oocytů bude komplex oocyt-cumulus (OCC) kultivován po dobu 2 hodin při 37 °C, 6 % oxidu uhličitého (CO2) a 5 % kyslíku (O2). Mezitím bude příprava spermií prováděna pomocí gradientní techniky. Po 2 hodinách bude OCC zbavena a kultivována po dobu 1 hodiny až do intracytoplazmatické injekce spermií (ICSI). Oocyty po ICSI budou kultivovány ve skupinách po 3-4 oocytech ve stejných podmínkách 37°C, 6% CO2 a 5% O2. Postup kontroly hnojení je 16-18 hodin po ICSI. V den 3 budou embrya hodnocena za 66–68 hodin po ICSI, embrya stupně 1 jsou identifikována se 7–9 blastomerami a fragmentace je od 0–10 %. Pacientky budou informovány o kvalitě embryí. Pokud není rozhodnuto o transferu embryí 5. den, bude pacientka konzultována s transferem 3. den. Frekvence blastulace nebude zaznamenána.

V případě skupiny se sekvenčním kultivačním médiem budou embrya přenesena do média Sequential Blast. U skupiny s jednokrokovým kultivačním médiem budou embrya přenesena do nové kultivační misky se stejným médiem. V den 5 bude hodnocení kvality embrya 116±1 hodina po ICSI. Klasifikace blastocyst je založena na expanzi, kvalitě vnitřní buněčné hmoty a kvalitě trofektodermu. Budou přeneseny dvě dobré blastocysty. Po 11 dnech bude vyžadován test na beta-lidský choriový gonadotropin (hCG). Pokud je výsledek beta-hCG pozitivní, bude nutné vyšetření po 3 týdnech a luteální podpora bude podávána do 7 týdnů.