Inovativní přístup k třídění prekancerózy dutiny ústní (iTOP)

Nárůst pacientů Tato studie bude probíhat na Otolaryngologické klinice ve Vancouver General Hospital. K účasti ve studii bude zapsáno tři sta šedesát dobrovolných subjektů. Podrobné kroky přírůstku pacientů ve studii jsou uvedeny níže.

1. Vytvoření referenčních kanálů pro skutečnou populační kohortu OPL v BC.

   V BC, BC Oral Biopsy Service (OBS) a patologické oddělení ve Vancouver General Hospital (VGH) přijímají bioptické a chirurgické vzorky od zubních a lékařských komunit. Tyto centralizované bioptické služby nabízejí velmi vzácnou příležitost k vytvoření populační kohorty OPL. Tým patologů identifikuje způsobilé pacienty prostřednictvím procesu odhlášení z patologie a zavolá odesílající lékaře, aby informovali potenciální referenční kanál jako alternativní léčbu pro tyto pacienty. V současné době existuje referenční kanál pro těžkou dysplazii nebo pokročilejší orální malignitu využívající tento model a byl zaveden pro odesílání chirurgických pacientů do studie COOLS financované TFRI (od Dr. Durham a Poh; H09-03090). Stejný systém/potrubí bude použit k identifikaci vhodných pacientů s diagnostikovanou mírnou a/nebo středně těžkou dysplazií zjištěnou jak v lékařské, tak v zubní komunitě.

2. Způsobilost Subjekty starší 19 let navštěvují zubní nebo otorinolaryngologickou kliniku ve Vancouver General Hospital (Vancouver Acute) za účelem posouzení orálních lézí s diagnostikovanou mírnou nebo středně těžkou dysplazií; jsou ochotni dát informovaný souhlas.
3. Postupy náboru a informovaného souhlasu Potenciálně způsobilým pacientům bude týden před datem jejich schůzky zaslán zvací dopis týkající se této studie spolu se souhlasným dokumentem. V den klinické návštěvy výzkumný asistent vysvětlí studii způsobilému subjektu a získá podepsaný souhlas od účastníků. Bude přijato 400 subjektů. Tito pacienti budou sledováni jednou za půl roku (současný standard péče). Je-li to klinicky odůvodněno známkami progrese onemocnění nebo po 2letém sledování, budou provedeny dvě 5mm biopsie děrování na oblastech lézí s různou závažností (jak je stanoveno zobrazovacími technologiemi). Dvouletá srovnávací biopsie u stabilní léze je současným standardem péče.

Postupy studie Studie je longitudinální studií podle schématu sledování současného standardu péče o takové léze, tj. jednou za 6 měsíců a srovnávací biopsie jednou za 2-3 roky. Důležitými časovými body jsou počáteční návštěva (základní hodnota), na konci druhého, pátého a osmého roku následných návštěv. Doba biopsie je však založena výhradně na klinickém úsudku klinických lékařů, tj. na známkách progrese onemocnění.

1. Sběr klinických dat Poté, co subjekt souhlasí, bude požádán o vyplnění sady dotazníků pro sběr informací o demografických údajích a rizikových faktorech. Subjektu bude přiděleno ID studie a se shromážděnými údaji nebude spojen žádný jedinečný identifikátor. K propojení ID studie a identifikátorů pacienta bude použit samostatný soubor. To je důležité pro usnadnění léčby pacienta a zachycení informací o výsledku. Tento soubor s jedinečným identifikátorem pacientů bude uložen v souboru chráněném heslem v počítači BC Cancer Research Center (BCCRC) v uzamčené kanceláři v BCCCRC a přístup k souboru mají pouze PI. Zdravotní stav a dotazník HAI neslouží k diagnostickým účelům. Pokud se kliničtí lékaři domnívají, že je u účastníka přítomna deprese nebo úzkost (klinický úsudek lékařů), kliničtí lékaři ve studii odpovědní za tohoto konkrétního účastníka budou komunikovat s rodinným lékařem pacienta a odkáží účastníka na vhodný zdroj pro další hodnocení a řízení.

2. Sběr dat pomocí studijního zařízení

   • Lékaři vyšetří pacienty pomocí WL, VELScope VX pro FV (dříve schváleno, R05-0116), OCT (dříve schváleno, H09-01955) a ručního konfokálního mikroskopu (H11-00011).
   • OCT zobrazení: Po identifikaci abnormálních oblastí pro biopsii pomocí WL a FV vyšetření lékař umístí optickou sondu OCT na zájmové oblasti ústní sliznice. Místo pro umístění sondy určí PI (otolaryngologové-chirurgové hlavy a krku (SD/DA) a/nebo specialista na orální medicínu/orální patologii (Ng/Poh)). Snímky budou zaznamenávány strojem pro pozdější analýzu.
   • Zobrazování konfokálním mikroskopem: Po OCT zobrazení lékař aplikuje 0,05% roztok Acriflavine Hydrochloride lokálně na oblasti ústní sliznice, které jsou předmětem zájmu, po dobu 30 sekund před zobrazením. Lékař umístí na povrch sliznice ruční konfokální mikroskop, aby zaznamenal pozorování pro pozdější analýzu.
   • Bude vynaloženo veškeré úsilí ke snížení jakéhokoli mírného nepohodlí, které by mohlo být spojeno s umístěním sondy do ústní dutiny subjektu. OCT sonda nebo konfokální mikroskop budou před a po použití subjektem zakryty plastovou bariérou a dezinfikovány standardními metodami používanými pro nástroje ústní dutiny. Vyšetření přístroje nezabere více než 15 minut navíc k času určenému pro rutinní návštěvy subjektu. Maximální intenzita osvětlení tkáně pro každé měření bude nižší než prahová limitní hodnota (TLV) stanovená Americkou konferencí vládních průmyslových hygieniků (ACGIH)11 pro vystavení širokopásmovému světlu.
   • Informace získané z měření polarizované odrazivosti budou porovnány s histologií a kvantitativní patologií (skóre jaderného fenotypu) tkáňových řezů z léze. Shromážděná spektrální data z normálně vypadajících oblastí z přilehlé normálně vypadající sliznice a kontralaterální sliznice budou použita k určení odchylky od pacienta k pacientovi v polarizované odrazivosti ústní sliznice.
3. Odběr vzorků exfoliativním kartáčkem (dříve schválený, R05-0116) Cytologický kartáček Innovatec (Arcona Inc) se používá k odběru exfoliovaných buněk z ústní léze. Tyto kartáčky se přenesou do roztoku PreservCyt® (Cytyc Corp.) a uchovávají se v chladničce při teplotě 4ºC.
4. Odběr krevních vzorků Celkem bude na klinice odebráno 12 ml (3/4 polévkové lžíce) krevního vzorku do 1 SST a 1 EDTA vakuovače na klinice vyškoleným výzkumným personálem. Vzorek krve bude zpracován a vzorky séra, plazmy a nafouknutého pláště budou alikvotně zmraženy na -80ºC pro budoucí analýzu. Vzorky DNA v nafouklém povlaku budou extrahovány a použity jako normální kontrolní vzorek pro analýzu ztráty heterozygotnosti (LOH). K tomuto účelu bude použit samostatný souhlas. Předpokládáme, že budou spotřebovány všechny alikvoty séra, plazmy a nadýchané vrstvy. Jakákoli zbývající tkáň nebude vyhozena ani prodána, ale bude uložena v uzamčené mrazicí místnosti v BC Cancer Agency po dobu až patnácti let, aby bylo možné potvrdit výsledky této studie.
5. Odběr zmrazené tkáně V případě biopsie bude tkáň rozpůlena. Polovina vzorku bude fixována ve formalínovém roztoku a odeslána do patologické laboratoře k analýze jako běžná součást lékařského diagnostického postupu. Část této tkáně bude uchována a použita až po stanovení diagnózy. Tkáň nebude v žádném okamžiku odebírána pouze za účelem výzkumu. Darovaná tkáň dostane od vedoucího projektu kód pro identifikaci a bude uchovávána v zabezpečených mrazících boxech v BC Cancer Agency, dokud nebude extrahován genetický materiál (DNA a RNA) pro analýzu. K tomuto účelu bude použit samostatný souhlas. Předpokládáme, že veškerá darovaná tkáň bude vyčerpána. Jakákoli zbývající tkáň nebude vyhozena ani prodána, ale bude uložena v uzamčené mrazicí místnosti v BC Cancer Agency po dobu až patnácti let, aby bylo možné potvrdit výsledky této studie.
6. Mikrodisekce tkáně a extrakce DNA. Formalinem fixované, parafínem zalité tkáňové bloky z úvodní biopsie a biopsie z následné návštěvy budou získány z oddělení anatomické patologie, Vancouver General Hospital. v době klinické změny nebo při následné návštěvě po 24 měsících bude požádáno o zpracování. Deset 10 µm silných řezů pro vzorek DNA, 2 4µm neobarvené tkáňové řezy pro kvantitativní histologickou analýzu. Oblasti dysplazie na tlustých řezech budou identifikovány a mikrodisekovány. Vzorek DNA z epitelu bude extrahován a použit pro analýzu LOH.