Identificación de macrófagos patógenos únicos en la esclerosis sistémica-ILD

Mediante el uso de tecnología de vanguardia de RNA-Seq de células individuales, identificaremos en el fluido BAL de sujetos con SSc-ILD poblaciones de células patógenas emergentes en el pulmón que antes no se habían reconocido mediante tecnologías estándar de RNA-Seq y microarrays, que carecen de la resolución para analizar transcriptomas de células individuales. Los macrófagos alveolares aislados del líquido de lavado broncoalveolar (BAL) de pacientes con SSc y fibrosis pulmonar clínicamente significativa se estudiarán al inicio y 6 meses después de la inscripción para evaluar longitudinalmente la presencia y persistencia de una población emergente de macrófagos alveolares profibróticos.

Los sujetos con SSc-ILD serán reclutados del Programa de esclerodermia. Reclutaremos adultos que cumplan con los criterios de SSc del American College of Rheumatology (ACR) de 2013 y enfermedad pulmonar intersticial de SSc clínicamente relevante. Los pacientes se someterán a broncoscopia con lavado broncoalveolar en el mes 0 y luego en el mes 6. Los sujetos de control saludables completarán formularios médicos básicos y demográficos para garantizar la salud. Los datos clínicos pertinentes se descargarán de Enterprise Data Warehouse, una base de datos electrónica en uso en Northwestern que fue diseñada para agregar y almacenar datos de pacientes de varios sistemas médicos, o a través de la revisión manual de gráficos, y se ingresarán en una base de datos RedCap creada específicamente para este proyecto. .

Durante un procedimiento de broncoscopia electiva en SSc y sujetos de control sanos, el broncoscopio se encajará en un segmento pulmonar afectado guiado por tomografía computarizada. Después de encajar el broncoscopio, se instilarán 120 ml de solución salina normal al 0,09% estéril. Todas las alícuotas posteriores se combinarán. Se obtendrán hasta 40-60 ml de líquido BAL para análisis durante cada muestreo. Los macrófagos alveolares se clasificarán en un clasificador de células activadas por fluorescencia (FACS) instrumento Aria III. Los datos transcriptómicos de una sola célula de alto rendimiento (Drop-seq) se procesarán en el clúster computacional de alto rendimiento de Northwestern utilizando la canalización Cell Ranger y se procesarán posteriormente utilizando la canalización AltAnalyze modificada.