Respuesta inflamatoria subcutánea humana a los sensores de glucosa (TISSUESENSOR)

Se van a incluir dieciocho pacientes con DM tipo 1. Objetivos principales

1. Para definir la variabilidad intraindividual e interindividual del recuento de macrófagos alrededor del sensor
2. Valorar si existe relación entre el número de macrófagos, fibrosis y MARD del registro MCG.

Objetivos secundarios 1. Describir la histología de la respuesta tisular. Esta descripción incluirá:

1. Tinción HE: tipos celulares, disposición, estructuras vasculares, signos de hemorragia-coágulo. Tinción de Giemsa: mastocitos. Tinción tricrómica de Masson: str. vascular.

2. Inmunohistoquímica: Valoración vascular, caracterización de macrófagos (CD 68+), macrófagos tipo 1 (CD 68+ CD 163 -), macrófagos tipo 2 (CD 163+), CD31 como marcador vascular, mastocitos CD 117 2. Describir la acumulación de proteínas (biofouling) que se produce en la superficie del sensor.

   Criterios de inclusión 1. Diabetes tipo 1 (más de 6 meses de evolución), confirmada por positividad para Ab antiGAD 65 2. Ser usuario habitual de un sistema de monitorización continua de glucosa 3. Comprender la propuesta de protocolo y aceptación de participación. Criterio de exclusión

   1. Tratamiento con fármacos que potencialmente pudieran modificar la respuesta inflamatoria durante los 10 días previos a la cirugía (antiinflamatorios no esteroideos o corticoides, antioxidantes o antiagregantes plaquetarios).

   Cada paciente tendrá 1 sensor de glucosa insertado en el brazo no dominante. Se determinará HbA1c (HbA1c; DCA 2000+; Siemens Healthcare Diagnostics).

   . Durante la vida útil del sensor (10), se realizarán un mínimo de 4 determinaciones de glucemia capilar/día (antes del desayuno, antes de la comida, antes de la cena, antes de acostarse); (obteniendo 1 microL de sangre entera) utilizando siempre el mismo glucómetro.

   El sensor tiene una longitud de 8 mm y un diámetro de 0,4 mm. Se facilitará todo el material necesario, incluido un diario de control para ayudar al paciente a recordar realizar el autocontrol y fijar su distribución horaria.

   El último día de uso del sensor, se retirará y se realizará una biopsia de piel con sacabocados de 4 mm 5 minutos después.

   Las muestras de tejido se fijarán en una solución de formaldehído al 4 %, se fabricarán y seccionarán bloques de parafina. Las muestras resultantes se teñirán con hematoxilina/eosina (HE), Giemsa y tricrómico de Masson. Se realizará determinación semicuantitativa de linfocitos, neutrófilos, mastocitos, macrófagos (- 0; +/- <20; + 20-40; ++ 40-80; +++ > 80 células/campo de gran aumento); fibrina, fibrosis, proliferación vascular y cariorrexis (-, ausente; +/-, muy leve; +, leve, ++, moderada; +++, grave).

   Un subgrupo de 6 sensores de 6 pacientes se cortará con un bisturí desde la raíz y se almacenará en glutaraldehído a 4ºC para su evaluación por microscopía electrónica de barrido.

   En todos los casos se realizará estudio inmunohistoquímico cuantitativo con recuento de campo x40 con fotografías y grilla (Dako omnis con sistema envision) para: Macrófagos fenotipo I (CD68), fenotipo II CD163 • mastocitos (CD 117)

   • proliferación vascular (CD34)
   • TGFb

   Se recuperará el monitor-glucómetro para su descarga y estudio del registro. Los pares intersticiales glucosa - sangre se realizarán con los registrados pero no utilizados para la calibración.