Effetto della vitamina E sulla steatosi epatica non alcolica

Procedure di studio (soggetti sani e NAFLD/NASH) Screening (settimana -2) Prima dell'inizio della sequenza temporale, tutti i potenziali partecipanti allo studio saranno valutati da un'infermiera ricercatrice per ottenere il consenso informato, una breve storia medica, altezza, peso, massa corporea indice, circonferenza vita/fianchi, segni vitali, circa 20 ml. di sangue per i laboratori di screening e di urina per l'analisi. I soggetti NAFLD/NASH senza sierologie epatiche disponibili riceveranno altri 25 ml di prelievo di sangue. Questa visita durerà circa 60 minuti e includerà un questionario di screening per la storia familiare della malattia, le attività della vita quotidiana (ADL) e il consumo di alcol. I soggetti diabetici tratterranno anche il loro agente diabetico orale prima del lavoro di laboratorio di screening a digiuno.

Visita di insegnamento: (settimana -2 o prima della settimana -1): un'infermiera ricercatrice fornirà ai soggetti diabetici un corso di aggiornamento di 30 minuti sul diabete che includerà i segni ei sintomi dell'iper e dell'ipoglicemia. Ad ogni soggetto diabetico verrà consegnato un libretto didattico. Alcuni pazienti diabetici di tipo 2 (T2DM) che assumono solo farmaci per via orale non controllano regolarmente la glicemia. Se il paziente non ha un glucometro, forniremo un glucometro, forniture e istruzioni per l'uso da parte dei nostri volontari dello studio diabetico durante la loro partecipazione allo studio.

Prima dell'inizio della dieta standardizzata, i soggetti manterranno la loro normale routine alimentare. Per tre o quattro giorni prima delle procedure del protocollo, i soggetti verranno sottoposti a una dieta standardizzata fornita dalla cucina metabolica del CTRC. Inoltre, i partecipanti si asterranno dall'esercizio fisico almeno 3 giorni prima delle procedure. Inoltre, i partecipanti al T2DM tratterranno i loro agenti diabetici orali per 3-4 giorni prima delle procedure del protocollo.

Fenotipizzazione (settimana -1) Ai partecipanti verrà chiesto di annotare il consumo di cibo e bevande per tre giorni prima di questa visita. Questo registro alimentare verrà trasformato nel dietologo presso il Centro di ricerca traslazionale clinica (CTRC) per il calcolo di proteine, carboidrati e grassi al fine di calcolare un piano alimentare su misura di 3,5 giorni da consumare appena prima del digiuno notturno.

Ai partecipanti verrà chiesto di non mangiare o bere nulla dopo la mezzanotte prima di questa visita in preparazione per le procedure di studio del giorno.

I partecipanti diabetici tratterranno i loro agenti diabetici orali per 3 giorni prima della visita di fenotipizzazione e il giorno della visita. Durante questo periodo, verranno istruiti a controllare la glicemia 30 minuti prima di ogni pasto e prima di coricarsi ogni giorno e informeranno l'infermiere ricercatore o il medico dello studio se il loro livello di glucosio nel sangue è inferiore a 70 mg/dl o superiore a 250 mg/dl.

I partecipanti arriveranno all'Advanced Imaging Research Center (AIRC) alle 8:30 circa. Durante la mattinata, i partecipanti eseguiranno misurazioni del grasso epatico nello scanner a risonanza magnetica (MR) da 3 Tesla (3T) e misurazione del loro quoziente respiratorio (RQ) utilizzando un calorimetro indiretto. Immediatamente dopo la scansione, verranno posizionati due cateteri endovenosi in preparazione per lo studio insulina/morsetto: un catetere venoso antecubitale per infondere destrosio e insulina e un catetere venoso dorsale della mano per il prelievo di sangue. La mano sarà tenuta in una scatola calda a 70 °C per l'arterializzazione del sangue venoso. Tre 10 ml. saranno ottenuti prelievi di sangue per la misurazione del livello di glucosio al basale, la preparazione dell'infuso di insulina e l'analisi chimica del sangue. Alle 11:30 circa, verrà avviata un'infusione continua innescata di insulina umana regolare per la durata di 2 ore. Un'infusione di destrosio al 20% verrà iniziata dopo 4 minuti di infusione di insulina e aggiustata per mantenere l'euglicemia. Verrà prelevata una piccola quantità di sangue (1 ml.) ogni 5 minuti per 2 ore per monitorare la concentrazione di glucosio plasmatico. La quantità totale di sangue richiesta per l'intera procedura è di circa 80 ml. Verrà raccolto un campione di urina per la determinazione delle perdite di glucosio urinario nello stato post-assorbimento. Circa 3 volontari sani avranno un'ulteriore misurazione del grasso epatico dopo il morsetto dell'insulina per determinare se i cambiamenti sono evidenti dal test. Al partecipante verrà quindi fornito un pasto e dimesso dall'AIRC. La durata di questa visita è di circa 7 ore.

I partecipanti diabetici Overnight Fast (Settimana 0) tratterranno i loro agenti diabetici orali per 4 giorni prima della visita Overnight Fast e il giorno della visita. Durante questo periodo, verranno istruiti a controllare la glicemia 30 minuti prima di colazione e prima di coricarsi ogni giorno e informeranno l'infermiere ricercatore o il medico dello studio se il loro livello di glucosio nel sangue è inferiore a 70 mg/dl o superiore a 250 mg/dl.

Quattro giorni prima degli studi metabolici, i partecipanti inizieranno una dieta su misura fornita dalla cucina metabolica del CTRC. Il giorno prima degli studi sul digiuno, tutti i partecipanti consumano l'ultimo pasto a mezzogiorno e iniziano a digiunare.

Il giorno seguente arriveranno all'Advanced Imaging Research Center per una spettroscopia di risonanza magnetica epatica (MRS). Ossido di deuterio (noto anche come acqua pesante), il primo isotopo stabile, verrà somministrato in base al peso del partecipante in tre dosi divise.

I partecipanti riceveranno propionato marcato con carbonio-13 [U-13C] (tre dosi da 400 mg somministrate per via orale nell'arco di 1 ora). Durante lo studio, i soggetti riceveranno anche acqua pesante allo 0,5% ad libitum. I soggetti verranno sottoposti a misurazione del loro quoziente respiratorio (RQ) utilizzando un calorimetro indiretto appena prima del protocollo di infusione. Ai soggetti verrà quindi posizionato un catetere endovenoso e un'infusione degli isotopi stabili [3,4-13C2]glucosio marcato con carbonio-13, [1,2-13C]acetoacetato marcato con carbonio-13 e [3,4- 13C]3-idrossibutirrato iniziato in due ore. Durante questo periodo, 5 ml. ogni ora verranno effettuati prelievi di sangue per determinare i livelli plasmatici di acidi grassi non esterificati (NEFA), chetoni, glucosio, insulina e glucagone. Due ore dopo l'inizio dell'infusione, 50 ml. verranno eseguiti prelievi di sangue per ottenere campioni per la determinazione spettroscopica della velocità di chetogenesi e ossidazione del citrato nel ciclo dell'acido citrico (TCA). Al completamento delle procedure di studio, l'infusione di isotopi stabili verrà interrotta e i partecipanti verranno inviati alla clinica ambulatoriale del CTRC per Dual Energy x-Ray Absorptiometry (DEXA) per determinare la misurazione stimata del grasso corporeo totale. Dopo la DEXA, i soggetti sani verranno dimessi a domicilio; I soggetti NAFLD saranno ammessi al CTRC per la biopsia epatica, se necessario.

La conclusione degli studi metabolici nella settimana 0 segna la fine dello studio per i soggetti di controllo, mentre i soggetti NAFLD inizieranno la terapia con vitamina E o placebo in questo momento. A tutti i soggetti verrà somministrato un pasto e valutata la stabilità (segni vitali entro limiti normali) prima della dimissione a casa. La quantità totale di sangue raccolto per gli studi sul digiuno notturno sarà inferiore a 325 ml.

Visite di follow-up (settimane 4, 8, 12) I soggetti visiteranno l'infermiere ricercatore e/o il dottor Browning per monitorare l'adesione al regime di vitamina E/placebo. Ad ogni visita di follow-up, ai soggetti verrà prelevato del sangue (circa 10 ml.) secondo la tabella 1. Inoltre, ogni volontario avrà un MRS per misurare il contenuto di trigliceridi nel fegato.

Visita fenotipica (settimana 16) Questa è una ripetizione della visita fenotipica alla settimana -1.

Digiuno notturno (settimana 17) Questa è una ripetizione del digiuno notturno alla settimana 0. Tutte le procedure, inclusi gli studi sugli isotopi, saranno le stesse.