Indice clinico molecolare misto (MMCI) nel linfoma diffuso a grandi cellule B (DLBCL) (MMCI)

Il linfoma diffuso a grandi cellule B (DLBCL) è un gruppo eterogeneo di tumori classificati insieme sulla base di morfologia, immunofenotipo, alterazioni genetiche e comportamento clinico. La distinzione di DLBCL in categorie di cellule di origine (COO), basate su modelli di espressione genica che ricordano (cellula B del centro germinale- il gruppo GC e cellula B attivata- il gruppo ABC-), come definito e caratterizzato dal linfoma & Leukemia Molecular Profiling Project (LLMPP), ha profonde implicazioni biologiche, prognostiche e potenziali terapeutiche e, inoltre, l'effetto prognostico negativo dell'oncogene della mielocitomatosi (MYC), del linfoma a cellule B 2 (BCL2) e del linfoma a cellule B-6 (BCL6 ) è stato dimostrato che le alterazioni in DLBCL dipendono ampiamente dai sottotipi COO . Inoltre, la combinazione delle alterazioni di BCL2, MYC e BCL6 con IPI (International Prognostic Index), identifica gruppi prognostici marcatamente peggiori all'interno dei singoli sottotipi di COO. I metodi originali utilizzati per definire queste entità eseguivano il profilo di espressione genica (GEP) utilizzando microarray su RNA derivato da tessuto congelato (FT). Successivamente, nel tentativo di determinare il COO nella pratica standard utilizzando il tessuto incluso in paraffina fissato in formalina (FFPE) comunemente disponibile, sono stati utilizzati metodi di immunoistochimica binaria (IHC) meno precisi ma relativamente economici . Tuttavia, in particolare nei non GC, il tasso di concordanza era insoddisfacente. Un alto grado di accordo è stato invece dimostrato nella determinazione del COO, con una firma di 20 geni da campioni tumorali fissati in formalina e inclusi in paraffina (FFPE), con il kit Lymph2Cx (nCounter® Technology, NanoString Technologies), diventando il gold standard suggerito in World Classificazione dell'Organizzazione Sanitaria (OMS). Tuttavia recentemente, è stato dimostrato che il COO e lo stato di BCL2, MYC, BCL6 non sono sufficienti per descrivere il rischio molecolare di questi pazienti, suggerendo una sottostruttura genetica ancora da scoprire. Inoltre, anche il microambiente tumorale e in particolare il rapporto tra effettori immunitari e molecole di checkpoint hanno un ruolo prognostico nel DLBCL. Inoltre, l'elevata frequenza di miofibroblasti, cellule dendritiche e cellule T positive al cluster di differenziazione 4 (CD4) era correlata a risultati migliori.

In conclusione, un'analisi genomica completa di questi pazienti e una profonda caratterizzazione del compartimento immunitario e dei checkpoint immunitari (Nanostring, immunoistochimica per BCL2, MYC, BCL6, analisi delle mutazioni, analisi proteomica ecc.) unita al punteggio IPI, consentirà la creazione di un indice misto, molecolare, clinico (MMCI) per identificare gruppi prognostici estremamente poveri, all'interno di ciascun sottotipo di COO, per prendere in considerazione trattamenti adattati al rischio in futuro.

Si tratta di uno studio osservazionale prospettico della durata complessiva di 36 mesi. L'obiettivo primario è l'identificazione di nuovi biomarcatori prognostici per i pazienti con DLBCL in termini di sopravvivenza libera da progressione (PFS) e in grado di aggiungere capacità predittiva a importanti fattori clinici riconosciuti.

Gli obiettivi secondari sono:

• identificare nuovi biomarcatori associati alla sopravvivenza globale (OS) e al tasso di risposta obiettiva (ORR);
• caratterizzare il tessuto e il microambiente immunitario circolante dei pazienti affetti da DLBCL mediante trascrittomica bulk e singola cellula;
• valutare la correlazione tra l'espressione dei geni del checkpoint immunitario e la firma dell'mRNA;
• descrivere lo stato mutazionale di un pannello di geni rilevanti per la patogenesi del DLBCL;.
• valutare la correlazione tra espressione proteica, stato mutazionale e firma dell'mRNA.

Per ogni paziente arruolato, le determinazioni immunoistochimiche saranno eseguite da ciascuna Unità di Patologia: COO (tipo GC o ABC secondo l'algoritmo di Hans), valutazione di CD20, CD5, CD10, Bcl6, Bcl2 (cut off>50%), MUM1/IRF4, c-myc (cut off>40%) e Ki67, FISH per c-myc e se riarrangiato, per Bcl2 e Bcl6). Inoltre, i campioni tumorali inclusi in paraffina (FFPE) saranno raccolti per l'estrazione dell'RNA e l'analisi dell'espressione dell'mRNA e centralizzati presso l'IRST-IRCCS.