Ringiovanimento ovarico mediante plasma ricco di piastrine (PRP) e frazione vascolare stromale di tessuto autologo (tSVF) e tSVF arricchito di cellule (OVAR-REJUV)

Il posizionamento intra-ovarico di plasma ricco di piastrine (PRP) è già stato dimostrato in diverse serie per riportare i livelli ormonali in peri-menopausa e all'inizio della post-menopausa verso i livelli pre-menopausali e il comportamento ciclico pre-menopausale, anche con conseguenti gravidanze e parti sani neonati. L'intento di questo studio è valutare l'utilità del PRP per migliorare lo stato ormonale e la sintomatologia clinica nelle donne in peri-menopausa e post-menopausa precoce e nelle donne con insufficienza ovarica prematura non di Turner, documentando i miglioramenti nei parametri biochimici/ormonali , densità ossea e qualità della vita correlata alla salute fisica e mentale, oltre a confrontare la durata e l'efficacia di questa procedura PRP con il posizionamento intra-ovarico di elementi cellulari e citochine biocellulari fisiologicamente attivi contenuti all'interno della frazione stromale vascolare derivata dal tessuto adiposo (tSVF).

Va notato che il tasso di perdita di densità ossea nelle donne è massimo nei 12 mesi precedenti e nei 24 mesi successivi alla menopausa. Le quantità percentuali assolute e relative di grasso corporeo e muscolo cambiano in modi avversi - con l'aumento del grasso e la diminuzione della massa muscolare, con i cambiamenti più drammatici che si verificano anche nel periodo di transizione della menopausa. Questo studio offre quindi il potenziale per documentare la cessazione misurabile della perdita di densità ossea o la riduzione del tasso di perdita di densità ossea rispetto a modelli noti ben consolidati e controlli storici come risultato degli interventi relativamente innocui proposti. La stessa tecnologia utilizzata per la valutazione della densità ossea, l'assorbimetria a singolo fotone, sarà utilizzata anche per quantificare la composizione corporea del grasso rispetto al muscolo al basale ea 18 mesi.

La SVF può essere ulteriormente caratterizzata come SVF cellulare o SVF tissutale (cSVF o tSVF). La SVF tissutale (tSVF) si ottiene mediante aspirazione manuale con microcannula a siringa chiusa di piccolo volume del tessuto adiposo sottocutaneo (circa 10+ cucchiaini da tè), seguita da decantazione a sistema chiuso per rimuovere i fluidi infranatanti seguita dall'emulsione del residuo fino al grado di omogeneità richiesto e dimensione ridotta del particolato per consentire l'iniezione attraverso i fori dell'ago di un calibro convenzionale. La SVF tissutale è caratterizzata dalla ritenzione di una parte della matrice non cellulare di residui vascolari collageni e fini, che insieme formano una matrice che trattiene e fornisce struttura agli elementi biocellulari che sono incorporati all'interno. La SVF cellulare (cSVF) inizia con la stessa mini-aspirazione, ma è caratterizzata da una centrifugazione a sistema chiuso, seguita dalla digestione enzimatica per isolare/concentrare la SVF cellulare (cSVF). Dopo la neutralizzazione enzimatica e il risciacquo, il concentrato risultante di cellule nucleate staminali/stromali vitali viene preparato per il posizionamento guidato nel tessuto parenchimale ovarico. Un campione di ciascun iniettato viene testato e quantificato utilizzando la citometria a flusso laser standard, inclusa la vitalità e il numero di cellule all'interno di ciascun campione.

Lo studio include l'uso del PRP (Emcyte II Pure PRP, Florida, USA) PRP secondo le istruzioni del produttore) da solo come controllo nel primo arto di trattamento (ARM), che volumetricamente sarà lo stesso degli altri iniettati, per il posizionamento guidato documentato all'interno delle ovaie . Un secondo ARM comparativo composto da PRP sarà combinato con tSVF emulsionato (Sterile Tulip Nanofat Disposable, San Diego, California (CA), USA). In un terzo ARM, PRP più tSVF emulsionato saranno combinati con entrambi i cSVF concentrati. Questo braccio serve a determinare gli effetti di una concentrazione cellulare superiore a quella ottenuta nel secondo ARM utilizzando i concentrati cellulari ottenuti utilizzando Centricyte 1000 (Healeon Medical Inc, Newbury Park, CA, USA). I risultati primari per ciascuna di queste procedure opzionali saranno confrontati e valutati in termini di sicurezza, efficacia clinica nel migliorare il ritorno della funzione ovarica per determinare la metodologia preferita per ottenere i massimi risultati.

Le caratteristiche del paziente al basale e monitorate sono le seguenti:

• Lo stato basale di tutti i pazienti sarà determinato utilizzando indici biochimici rilevanti, inclusi i livelli sierici di ormone follicolo-stimolante (FSH), ormone antimulleriano (AMH), ormone luteinizzante (LH), estradiolo (E2) e progesterone (PRG). Questi saranno ripetuti a 30 e 90 giorni, e poi ogni 3 mesi per altri 15 mesi, follow-up totale 18 mesi. Il pannello ematico completo (SMA 12), l'emocromo completo (CBC), i profili lipidici e gli indici di coagulazione saranno ottenuti al basale e ripetuti (senza indici di coagulazione) a 12 mesi.
• Poiché la densità ossea inizia a diminuire a un ritmo significativo nel periodo peri-menopausa, sarà ottenuta una determinazione della densità ossea con assorbimetria a singolo fotone al basale e di nuovo a 12 e/o 18 mesi. La composizione corporea, le proporzioni grasso/muscolo saranno valutate con la stessa tecnologia alla stessa seduta.
• La qualità della vita correlata alla salute fisica e mentale sarà valutata con le indagini sulla qualità della vita al basale, 6 e 12 mesi.
• Il volume ovarico sarà valutato al basale mediante ecografia endovaginale, insieme alla dimensione e al numero di follicoli presenti, e successivamente ogni 6 mesi.
• Registrazione del diario dei cicli mestruali - frequenza/intervallo, giorni e durata.

In ARM 1, solo il PRP verrà inserito all'interno delle ovaie. In ARM 2, PRP sarà combinato con tSVF. In ARM 3, tSVF sarà combinato sia con cSVF che con PRP. Volumi corrispondenti di iniettato verranno utilizzati in ciascun ARM per evitare problemi di potenziale interferenza al parenchima ovarico che influiscono sull'esito a causa di effetti di volume variabile. Verranno confrontati i risultati primari per ciascuno di questi bracci, informandoci di una metodologia preferita per un'ulteriore valutazione e, in definitiva, la pratica clinica.

Il plasma ricco di piastrine autologo è una modalità di trattamento consolidata che utilizza metodologie e kit approvati dalla FDA e si è sviluppata in una modalità di trattamento matura per una varietà di patologie ortopediche e dei tessuti molli. Come notato, la sua sicurezza e utilità nel ringiovanimento ovarico e nell'inversione dell'infertilità è già stata stabilita in serie di casi sottoposti a revisione paritaria.

La sicurezza dell'uso di alcune cellule staminali mesenchimali umane allogeniche (hMSC) è stata proposta e testata in modo limitato per l'efficacia in alcuni studi precedenti. I prodotti testati hanno protocolli variabili nell'isolare e documentare contenuto e viabilità cellulare.

Le cellule staminali-stromali autologhe (contenute all'interno di cSVF) sono state segnalate sicure ed efficaci in molte applicazioni/studi e in studi clinici attualmente in corso in altri sistemi e patologie del corpo. Queste cellule sono facilmente ottenute e isolate/concentrate in un sistema chiuso dalla frazione vascolare stromale derivata adiposa del paziente (tSVF). Ciò è importante in quanto tali tessuti sono le cellule geneticamente uniche del paziente e, in teoria, potenzialmente più sicure delle cellule staminali mesenchimali umane allogeniche (hMSC) che sono potenzialmente geneticamente estranee e comportano il rischio di contaminazione durante la lavorazione e la consegna.

Un approccio combinato può consentire l'implementazione di un numero opportunamente maggiore di cellule, fattori di crescita, esosomi/microvescicole senza la necessità di espansione della coltura.

Il contenuto del cSVF contiene una popolazione eterogenea di cellule non designate (simil-staminali) e di supporto (stromali). Si ritiene che questa combinazione di cellule autologhe adulte, insieme a cellule stromali, offra importanti qualità terapeutiche e rigenerative basate sulle caratteristiche di differenziazione cellulare e sul paracrino (segnali di comunicazione secretoria e risposte alla nicchia) in vari gradi. Si ritiene che tale segnalazione possa costituire il meccanismo proprio del corpo per l'omeostasi e la rigenerazione. L'interazione di questi complessi segnali biochimici viene proposta per reclutare ulteriormente o attivare processi riparativi con l'interazione con le cellule e i tessuti ospiti nativi. Inoltre, questo processo riparativo può diventare attività e bisogni specifici importanti dell'ospite nel luogo in cui si colloca la combinazione terapeutica. I precisi meccanismi alla base di questi processi riparativi sono oggetto di intense indagini.

In tutti i casi, le piastrine e i materiali biocellulari per l'iniezione intra-ovarica saranno posti sotto guida di imaging convenzionale utilizzando l'ecografia endovaginale. Verranno utilizzati aghi modificati appositamente progettati per fornire con precisione i prodotti biologici ai tessuti parenchimali intra-ovarici mirati. La metodologia richiesta è complessivamente molto simile al recupero degli ovociti nei trattamenti per l'infertilità, che vengono eseguiti in tutto il mondo, con un rischio minimo di effetti avversi milioni di volte all'anno.

È noto che le procedure provocano un disagio minimo, con una preparazione del paziente che varia da nessuna a una lieve ansiolisi di supporto. Il dolore post procedura, se presente, può essere gestito efficacemente con il paracetamolo. I pazienti vengono osservati dopo la procedura per 60-120 minuti e quindi dimessi con adeguate istruzioni scritte post-procedura per tornare periodicamente per il follow-up clinico e di laboratorio secondo il protocollo delineato nell'analisi dei risultati. L'obiettivo di questo studio cerca di confrontare la durata del miglioramento ormonale, clinico e della qualità della vita tra i 3 bracci dello studio.

Per la minoranza dei partecipanti allo studio in cui le ovaie non sono facilmente accessibili dall'ecografia endovaginale, un sottogruppo di pazienti può richiedere l'uso della guida laparoscopica. In tutti questi casi, gli interventi avranno luogo in ambito ospedaliero, con lo sperimentatore che prepara l'iniettato e il ginecologo o altri chirurghi specialisti idonei che eseguono la procedura laparoscopica utilizzando procedure standard come guida.