使用富含血小板血浆 (PRP) 和自体组织基质血管分数 (tSVF) 和细胞富集 tSVF 进行卵巢再生 (OVAR-REJUV)

卵巢内放置富含血小板的血浆 (PRP) 已经在几个系列中得到证明，可以将围绝经期和绝经后早期的激素水平恢复到绝经前水平和绝经前的周期性行为，甚至导致怀孕和健康分娩婴儿。 该试验的目的是通过记录生化/激素参数的改善，评估 PRP 在围绝经期和绝经后早期女性以及非特纳卵巢早衰女性中改善激素状态和临床症状的效用、骨密度和与身心健康相关的生活质量，以及将此 PRP 程序的持续时间和有效性与脂肪组织衍生的基质血管部分中包含的生物细胞生理活性细胞和细胞因子元素的卵巢内放置进行比较(tSVF)。

应该注意的是，女性骨密度的流失率在绝经前 12 个月和绝经后 24 个月内达到最大。 身体脂肪和肌肉的绝对和相对百分比量以不利的方式变化——脂肪增加和肌肉体积下降，最显着的变化也发生在绝经过渡期。 因此，由于拟议的相对无害的干预措施，与公认的已知模式和历史对照相比，本研究提供了记录可测量的骨密度损失停止或骨密度损失率降低的潜力。 用于骨密度评估的相同技术，单光子吸收测定法，也将用于量化基线和 18 个月时的脂肪与肌肉身体成分。

SVF 可以进一步表征为细胞 SVF 或组织 SVF（cSVF 或 tSVF）。 组织 SVF (tSVF) 是通过小体积手动闭合注射器微插管抽吸皮下脂肪组织（约 10+ 茶匙）获得的，然后进行封闭系统倾析以去除下层液体，然后将残余物乳化至所需的均匀度，减小颗粒尺寸以允许通过常规规格的针孔进行注射。 组织 SVF 的特点是保留了一定比例的胶原和细血管残余物的非细胞基质，它们一起形成了一个基质，该基质保留并为嵌入其中的生物细胞元素提供结构。 细胞 SVF (cSVF) 以相同的小型抽吸开始，但其特点是封闭系统离心，然后进行酶消化以分离/浓缩细胞 SVF (cSVF)。 在酶中和和漂洗之后，所得到的活干细胞/基质有核细胞浓缩物被准备用于引导放置到卵巢实质组织中。 使用标准激光流式细胞术对每个注射液的样本进行测试和量化，包括每个样本中的细胞活力和数量。

该研究包括单独使用 PRP（根据制造商的说明使用 PRP（Emcyte II Pure PRP，美国佛罗里达州）作为第一次治疗肢体 (ARM) 的对照，其体积与其他注射剂相同，用于在卵巢内记录的引导放置. 由 PRP 组成的对比第二 ARM 将与乳化的 tSVF（无菌郁金香纳米脂肪一次性用品，圣地亚哥，加利福尼亚州（CA），美国）结合。 在第三个 ARM 中，PRP 加乳化 tSVF 将与浓缩的 cSVF 结合。 该臂用于确定比第二个 ARM 更高的细胞浓度的影响，使用 Centricyte 1000（Healeon Medical Inc，Newbury Park，CA，USA）获得的细胞浓缩物。 将比较这些可选程序中每一个的主要结果，并评估安全性、增强卵巢功能恢复的临床疗效，以确定实现最大结果的首选方法。

基线和监测的患者特征如下：

• 所有患者的基线状态将利用相关生化指标确定，包括卵泡刺激素（FSH）、抗苗勒管激素（AMH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）和黄体酮（PRG）的血清水平。 这些将在第 30 天和第 90 天重复，然后每 3 个月重复一次，再持续 15 个月，总共随访 18 个月。 综合血液面板 (SMA 12)、全血细胞计数 (CBC)、血脂谱和凝血指数将在基线时获得，并在 12 个月时重复（无凝血指数）。
• 由于骨密度在围绝经期开始以显着的速度下降，因此将在基线时使用单光子吸收法测定骨密度，并在 12 和/或 18 个月时再次测定。 身体成分脂肪/肌肉比例将在同一次坐姿中使用相同的技术进行评估。
• 将在基线、6 个月和 12 个月时通过生活质量调查评估与身心健康相关的生活质量。
• 将通过阴道内超声在基线时评估卵巢体积，以及存在的卵泡的大小和数量，然后每 6 个月评估一次。
• 月经周期的日志记录 - 频率/间隔、天数和持续时间。

在 ARM 1 中，PRP 将单独放置在卵巢内。 在 ARM 2 中，PRP 将与 tSVF 结合使用。 在 ARM 3 中，tSVF 将与 cSVF 和 PRP 结合使用。 每个 ARM 将使用匹配体积的注射液，以避免由于体积变量效应对卵巢实质的潜在干扰影响结果的问题。 将比较每个分支的主要结果，告知我们用于进一步评估和最终临床实践的首选方法。

自体富血小板血浆是一种成熟的治疗方式，它利用 FDA 批准的方法和试剂盒，并已发展成为用于各种骨科和软组织病理的成熟治疗方式。 如前所述，其在卵巢再生和不孕症逆转方面的安全性和实用性已经在同行评审的病例系列中得到证实。

已提出使用某些同种异体人间充质干细胞 (hMSC) 的安全性，并在一些先前的研究中对其功效进行了有限的测试。 测试的产品在隔离和记录内容和细胞活力方面具有可变协议。

据报道，自体干基质细胞（包含在 cSVF 中）在许多应用/研究以及目前在其他身体系统和病理学中正在进行的临床试验中是安全有效的。 这些细胞很容易从患者的脂肪衍生基质血管部分 (tSVF) 中获得并在封闭系统中分离/浓缩。 这一点很重要，因为此类组织是患者自身的、遗传上独特的细胞，理论上可能比同种异体人间充质干细胞 (hMSC) 更安全，后者可能是外来基因，在加工和输送过程中存在污染风险。

一种组合方法可以允许实施更多数量的细胞、生长因子、外泌体/微泡，而无需进行培养扩增。

cSVF 的内容包含未指定（干状）和支持细胞（基质）的异质种群。 这种成人、自体细胞与基质细胞的组合被认为可在不同程度上提供基于细胞分化特征和旁分泌（分泌通讯信号和对生态位的反应）的重要治疗和再生品质。 据信，此类信号可能构成人体自身的稳态和再生机制。 这些复杂生化信号的相互作用被提议通过与天然宿主细胞和组织的相互作用进一步募集或激活修复过程。 此外，这种修复过程可能成为重要的特定宿主活动和放置治疗组合的位置的需要。 这些修复过程背后的确切机制正在深入研究中。

在所有情况下，用于卵巢内注射的血小板和生物细胞材料将置于使用阴道内超声检查的常规成像引导下。 专门设计的改良针头将用于准确地将生物制品输送到目标卵巢内实质组织。 所需的方法与不孕症治疗中的卵母细胞取出非常相似，这种方法在全球范围内进行，每年数百万次的不良反应风险极小。

众所周知，这些程序会导致最小的不适，患者的准备从无到轻度支持性抗焦虑不等。 对乙酰氨基酚可以有效控制术后疼痛（如果有的话）。 患者在手术后观察 60-120 分钟，然后根据结果分析中概述的方案，根据适当的手术后书面说明出院，定期返回进行临床和实验室随访。 本研究的目的是比较研究的 3 个分支在荷尔蒙、临床和生活质量改善方面的持续时间。

对于阴道内超声不易接近卵巢的少数研究参与者，一部分患者可能需要使用腹腔镜引导。 在所有此类情况下，干预将在医院环境中进行，研究者准备注射剂，妇科或其他合适的专科外科医生使用标准程序作为指导执行腹腔镜手术。