Omlazení vaječníků pomocí plazmy bohaté na krevní destičky (PRP) a autologní tkáňové stromální vaskulární frakce (tSVF) a tSVF obohacené o buňky (OVAR-REJUV)

Intraovariální umístění plazmy bohaté na krevní destičky (PRP) již bylo v několika sériích prokázáno, že navrací perimenopauzální a časně postmenopauzální hladiny hormonů k premenopauzálním hladinám a k premenopauzálnímu cyklickému chování, dokonce vede k těhotenství a porodu zdravých kojenců. Záměrem této studie je vyhodnotit užitečnost PRP ke zlepšení hormonálního stavu a klinické symptomatologie u žen v peri-menopauzálním a časném postmenopauzálním období a u žen s non-Turnerovým předčasným selháním vaječníků, dokumentováním zlepšení biochemických/hormonálních parametrů hustotu kostí a kvalitu života související s fyzickým a duševním zdravím, stejně jako srovnání trvání a účinnosti tohoto postupu PRP s intraovariálním umístěním biocelulárních fyziologicky aktivních buněčných a cytokinových prvků obsažených ve stromální vaskulární frakci odvozené z tukové tkáně (tSVF).

Je třeba poznamenat, že míra ztráty kostní denzity u žen je maximální během 12 měsíců před a 24 měsíců po menopauze. Absolutní a relativní procentuální množství tělesného tuku a svalů se mění nepříznivým způsobem – s rostoucím objemem tuku a klesajícím objemem svalů, přičemž k nejdramatičtějším změnám dochází také v období přechodu v menopauze. Tato studie proto poskytuje potenciál dokumentovat měřitelné zastavení ztráty kostní denzity nebo snížení rychlosti ztráty kostní denzity ve srovnání s dobře zavedenými známými vzory a historickými kontrolami jako výsledek navrhovaných relativně neškodných intervencí. Stejná technologie, která se používá pro hodnocení hustoty kostí, jednofotonová absorpciometrie, bude také použita ke kvantifikaci složení tuku versus svalového těla na začátku a po 18 měsících.

SVF lze dále charakterizovat jako buněčný SVF nebo tkáňový SVF (cSVF nebo tSVF). Tkáň SVF (tSVF) se získá maloobjemovou manuální aspirací podkožní tukové tkáně mikrokanylou uzavřenou injekční stříkačkou (přibližně 10+ čajových lžiček), následovanou dekantací v uzavřeném systému k odstranění infranatantních tekutin a následnou emulgací zbytku do požadovaného stupně homogenity a zmenšená velikost částic pro umožnění vstřikování skrz běžné otvory jehly kalibru. Tkáňový SVF je charakterizován zadržením části nebuněčné matrice kolagenních a jemných vaskulárních zbytků, které společně tvoří matrici, která zadržuje a poskytuje strukturu biocelulárním prvkům, které jsou v ní zabudovány. Buněčný SVF (cSVF) začíná stejnou miniaspirací, ale je charakterizován centrifugací v uzavřeném systému, následovaným enzymatickým štěpením za účelem izolace/koncentrace buněčného SVF (cSVF). Po enzymatické neutralizaci a opláchnutí se výsledný koncentrát životaschopných kmenových/stromálních jaderných buněk připraví pro řízené umístění do tkáně ovariálního parenchymu. Vzorek každého injektátu je testován a kvantifikován pomocí standardní laserové průtokové cytometrie, včetně životaschopnosti a počtu buněk v každém vzorku.

Studie zahrnuje použití samotného PRP (Emcyte II Pure PRP, Florida, USA) PRP podle pokynů výrobce) samotného jako kontroly v první léčené končetině (ARM), která bude objemově stejná jako u ostatních injekcí, pro řízené umístění zdokumentované ve vaječnících . Srovnávací druhý ARM složený z PRP bude kombinován s emulgovaným tSVF (Sterile Tulip Nanofat Disposable, San Diego, Kalifornie (CA), USA). Ve třetím ARM bude PRP plus emulgovaný tSVF kombinován s oběma koncentrovanými cSVF. Toto rameno má určit účinky vyšší buněčné koncentrace, než jaké bylo dosaženo ve druhém ARM pomocí buněčných koncentrátů dosažených pomocí Centricyte 1000 (Healeon Medical Inc, Newbury Park, CA, USA). Primární výsledky pro každý z těchto volitelných postupů budou porovnány a vyhodnoceny z hlediska bezpečnosti a klinické účinnosti při zvýšení návratu ovariální funkce za účelem stanovení preferované metodologie pro dosažení maximálních výsledků.

Základní a sledované charakteristiky pacientů jsou následující:

• Výchozí stav všech pacientů bude stanoven pomocí příslušných biochemických indexů, včetně sérových hladin folikuly stimulujícího hormonu (FSH), antimulleriánského hormonu (AMH), luteinizačního hormonu (LH), estradiolu (E2) a progesteronu (PRG). Ty se budou opakovat po 30 a 90 dnech a poté každé 3 měsíce po dobu dalších 15 měsíců, celkové sledování 18 měsíců. Komplexní krevní panel (SMA 12), kompletní krevní obraz (CBC), lipidové profily a indexy srážení budou získány na začátku a opakovány (bez indexů srážení) po 12 měsících.
• Jakmile začne kostní denzita klesat významnou rychlostí v perimenopauzálním období, stanovení kostní denzity s jednofotonovou absorpciometrií bude získáno na začátku a znovu po 12 a/nebo 18 měsících. Složení těla Poměry tuku/svalů budou hodnoceny stejnou technologií při stejném sezení.
• Kvalita života související s fyzickým a duševním zdravím bude hodnocena pomocí průzkumů kvality života na začátku, 6. a 12. měsíci.
• Ovariální objem bude vyšetřen na začátku endovaginální sonografií spolu s velikostí a počtem přítomných folikulů a poté každých 6 měsíců.
• Záznam menstruačních cyklů do deníku - frekvence/interval, dny a trvání.

V ARM 1 bude samotný PRP umístěn do vaječníků. V ARM 2 bude PRP kombinován s tSVF. V ARM 3 bude tSVF kombinován s cSVF a PRP. V každém ARM budou použity odpovídající objemy injekce, aby se předešlo otázce potenciální interference s ovariálním parenchymem ovlivňujícím výsledek v důsledku variabilních objemových účinků. Primární výsledky pro každé z těchto ramen budou porovnány, což nás informuje o preferované metodologii pro další hodnocení a nakonec i klinickou praxi.

Autologní plazma bohatá na krevní destičky je zavedenou léčebnou modalitou, která využívá metodiky a soupravy schválené FDA a vyvinula se ve vyspělou léčebnou modalitu pro různé ortopedické patologie a patologie měkkých tkání. Jak bylo uvedeno, jeho bezpečnost a užitečnost při omlazení vaječníků a zvrácení neplodnosti již byla prokázána v recenzovaných kazuistikách.

Bezpečnost použití určitých alogenních lidských mezenchymálních kmenových buněk (hMSC) byla navržena a omezeně testována na účinnost v některých předchozích studiích. Testované produkty mají různé protokoly v izolaci a dokumentaci obsahu a buněčné životaschopnosti.

Autologní kmenové stromální buňky (obsažené v cSVF) byly hlášeny jako bezpečné a účinné v mnoha aplikacích/studiích a v klinických studiích, které v současnosti probíhají u jiných tělesných systémů a patologií. Tyto buňky lze snadno získat a izolovat/koncentrovat v uzavřeném systému z pacientovy tukové stromální vaskulární frakce (tSVF). To je důležité, protože takové tkáně jsou pacientovy vlastní, geneticky jedinečné buňky a teoreticky jsou potenciálně bezpečnější než alogenní lidské mezenchymální kmenové buňky (hMSC), které jsou potenciálně geneticky cizí a nesou riziko kontaminace při zpracování a dodání.

Kombinovaný přístup může umožnit implementaci vhodně většího počtu buněk, růstových faktorů, exosomů/mikroveziklu bez potřeby expanze kultury.

Obsah cSVF obsahuje heterogenní populaci neoznačených (kmenových) a podpůrných buněk (stromální). Tato kombinace dospělých, autologních buněk spolu s buňkami stromatu nabízí v různé míře důležité terapeutické a regenerační vlastnosti založené na vlastnostech buněčné diferenciace a parakrinních (sekrečních komunikačních signálů a odpovědí do niky). Předpokládá se, že taková signalizace může představovat tělu vlastní mechanismus pro homeostázu a regeneraci. Interakce těchto komplexních biochemických signálů jsou navrženy pro další získávání nebo aktivaci reparačních procesů s interakcí s nativními hostitelskými buňkami a tkáněmi. Kromě toho se tento reparační proces může stát důležitými specifickými hostitelskými aktivitami a potřebami v místě, do kterého je terapeutická kombinace umístěna. Přesné mechanismy, které jsou základem těchto reparačních procesů, jsou intenzivně zkoumány.

Ve všech případech budou destičky a biocelulární materiály pro intraovariální injekci umístěny pod konvenční zobrazovací vedení s využitím endovaginální sonografie. K přesné aplikaci biologických produktů do cílených intraovariálních parenchymálních tkání budou použity speciálně navržené upravené jehly. Požadovaná metodika je celkově velmi podobná odběru oocytů při léčbě neplodnosti, která se provádí po celém světě, s minimálním rizikem nežádoucích účinků milionkrát ročně.

Je známo, že postupy vedou k minimálnímu nepohodlí, přičemž příprava pacienta se liší od žádné až po mírnou podpůrnou anxiolýzu. Bolest po zákroku, pokud existuje, lze účinně zvládnout pomocí acetaminofenu. Pacienti jsou po zákroku sledováni po dobu 60–120 minut a poté jsou propuštěni s vhodnými písemnými instrukcemi po zákroku, aby se pravidelně vraceli ke klinickému a laboratornímu sledování podle protokolu uvedeného v analýze výsledků. Cílem této studie je porovnat trvání hormonálního, klinického a zlepšení kvality života mezi 3 rameny studie.

U menšiny účastníků studie, u kterých nejsou vaječníky snadno dostupné endovaginálním ultrazvukem, může podskupina pacientek vyžadovat použití laparoskopického vedení. Ve všech těchto případech budou intervence probíhat v nemocničním prostředí, přičemž zkoušející připraví injekce a gynekologičtí nebo jiní vhodní specializovaní chirurgové provedou laparoskopický postup s využitím standardních postupů jako vodítka.