Odmładzanie jajników za pomocą osocza bogatopłytkowego (PRP) i autologicznej frakcji naczyniowej zrębu tkanki (tSVF) i tSVF wzbogaconego komórkami (OVAR-REJUV)

W kilku seriach wykazano już, że wewnątrzjajnikowe umieszczenie osocza bogatopłytkowego (PRP) przywraca poziomy hormonów w okresie okołomenopauzalnym i wczesnym okresie pomenopauzalnym do poziomów przedmenopauzalnych i cyklicznych zachowań przedmenopauzalnych, prowadząc nawet do ciąż i porodów zdrowych niemowlęta. Celem tego badania jest ocena przydatności PRP do poprawy stanu hormonalnego i symptomatologii klinicznej u kobiet w okresie okołomenopauzalnym i wczesnym okresie pomenopauzalnym oraz u kobiet z przedwczesną niewydolnością jajników inną niż Turner, poprzez udokumentowanie poprawy parametrów biochemicznych/hormonalnych , gęstość kości oraz jakość życia związana ze zdrowiem fizycznym i psychicznym, a także porównanie czasu trwania i skuteczności tej procedury PRP z umieszczeniem wewnątrz jajnika biokomórkowych fizjologicznie aktywnych elementów komórkowych i cytokin zawartych w frakcji naczyniowej zrębu pochodzącej z tkanki tłuszczowej (tSVF).

Należy zauważyć, że tempo utraty gęstości kości u kobiet jest największe w okresie 12 miesięcy przed menopauzą i 24 miesiące po menopauzie. Bezwzględne i względne procentowe ilości tkanki tłuszczowej i mięśniowej zmieniają się w niekorzystny sposób - wraz ze wzrostem tkanki tłuszczowej i spadkiem masy mięśniowej, przy czym najbardziej dramatyczne zmiany zachodzą również w okresie przejściowym menopauzy. Badanie to zapewnia zatem możliwość udokumentowania wymiernego zaprzestania utraty gęstości kości lub zmniejszenia szybkości utraty gęstości kości w porównaniu z dobrze ugruntowanymi znanymi wzorcami i historycznymi kontrolami w wyniku proponowanych stosunkowo nieszkodliwych interwencji. Ta sama technologia, która zostanie wykorzystana do oceny gęstości kości, absorpcjometria pojedynczego fotonu, zostanie również wykorzystana do ilościowego określenia składu tkanki tłuszczowej w stosunku do składu mięśniowego na początku badania i po 18 miesiącach.

SVF można dalej scharakteryzować jako komórkowy SVF lub tkankowy SVF (cSVF lub tSVF). Tkanka SVF (tSVF) jest uzyskiwana za pomocą ręcznej, zamkniętej strzykawki, zasysającej podskórną tkankę tłuszczową (około 10+ łyżeczek do herbaty) małej objętości, po czym następuje dekantacja układu zamkniętego w celu usunięcia płynów infranatantu, a następnie emulgacja pozostałości do wymaganego stopnia jednorodności i zmniejszony rozmiar cząstek stałych, aby umożliwić wtrysk przez konwencjonalne otwory igłowe. Tkanka SVF charakteryzuje się zatrzymaniem części niekomórkowej macierzy kolagenowych i drobnych pozostałości naczyniowych, które razem tworzą macierz, która zatrzymuje i zapewnia strukturę elementom biokomórkowym, które są w niej osadzone. Komórkowy SVF (cSVF) rozpoczyna się od tej samej mini-aspiracji, ale charakteryzuje się wirowaniem w układzie zamkniętym, po którym następuje trawienie enzymatyczne w celu wyizolowania/zatężenia komórkowego SVF (cSVF). Po zobojętnieniu enzymu i wypłukaniu otrzymany koncentrat żywotnych komórek macierzystych/podścieliska z jądrami przygotowuje się do ukierunkowanego umieszczenia w tkance miąższowej jajnika. Próbka każdego nastrzyku jest badana i oznaczana ilościowo przy użyciu standardowej laserowej cytometrii przepływowej, w tym żywotności i liczby komórek w każdej próbce.

Badanie obejmuje zastosowanie samego PRP (Emcyte II Pure PRP, Floryda, USA) PRP zgodnie z instrukcjami producenta) jako kontroli w pierwszej kończynie leczenia (ARM), która pod względem objętości będzie taka sama jak w przypadku innych wstrzyknięć, do udokumentowanego umieszczenia kierowanego w jajnikach . Porównawcza druga ARM złożona z PRP zostanie połączona ze zemulgowanym tSVF (Sterile Tulip Nanofat Disposable, San Diego, Kalifornia (CA), USA). W trzecim ARM, PRP plus zemulgowany tSVF zostanie połączony z obydwoma stężonymi cSVF. To ramię ma na celu określenie efektów wyższego stężenia komórkowego niż osiągnięte w drugim ARM przy użyciu koncentratów komórkowych uzyskanych przy użyciu Centricyte 1000 (Healeon Medical Inc, Newbury Park, CA, USA). Główne wyniki każdej z tych opcjonalnych procedur zostaną porównane i ocenione pod kątem bezpieczeństwa i skuteczności klinicznej w zwiększaniu powrotu funkcji jajników w celu określenia preferowanej metodologii osiągnięcia maksymalnych wyników.

Wyjściowa i monitorowana charakterystyka pacjentów jest następująca:

• Wyjściowy stan wszystkich pacjentów zostanie określony przy użyciu odpowiednich wskaźników biochemicznych, w tym poziomu hormonu folikulotropowego (FSH), hormonu anty-Mullerowskiego (AMH), hormonu luteinizującego (LH), estradiolu (E2) i progesteronu (PRG) w surowicy. Będą one powtarzane po 30 i 90 dniach, a następnie co 3 miesiące przez dodatkowe 15 miesięcy, łącznie przez 18 miesięcy. Kompleksowy panel krwi (SMA 12), pełna morfologia krwi (CBC), profile lipidowe i wskaźniki krzepnięcia zostaną uzyskane na początku badania i powtórzone (bez wskaźników krzepnięcia) po 12 miesiącach.
• Ponieważ gęstość kości zaczyna spadać w znacznym tempie w okresie okołomenopauzalnym, oznaczenie gęstości kości za pomocą absorpcjometrii pojedynczego fotonu zostanie uzyskane na początku badania i ponownie po 12 i/lub 18 miesiącach. Skład ciała Proporcje tłuszcz/mięśnie zostaną ocenione przy użyciu tej samej technologii podczas tego samego siedzenia.
• Jakość życia związana ze zdrowiem fizycznym i psychicznym zostanie oceniona za pomocą ankiet jakości życia na początku badania, po 6 i 12 miesiącach.
• Objętość jajników będzie oceniana wyjściowo za pomocą ultrasonografii dopochwowej, wraz z wielkością i liczbą obecnych pęcherzyków, a następnie co 6 miesięcy.
• Zapis w dzienniku cykli menstruacyjnych - częstotliwość/interwał, dni i czas trwania.

W ARM 1 samo PRP zostanie umieszczone w jajnikach. W ARM 2 PRP zostanie połączone z tSVF. W ARM 3 tSVF zostanie połączone zarówno z cSVF, jak i PRP. Dopasowane objętości iniekcji będą stosowane w każdym ARM, aby uniknąć kwestii potencjalnej ingerencji w miąższ jajnika, która miałaby wpływ na wynik z powodu efektów zmiennej objętości. Główne wyniki dla każdej z tych grup zostaną porównane, informując nas o preferowanej metodologii dalszej oceny, a ostatecznie o praktyce klinicznej.

Autologiczne osocze bogatopłytkowe to uznana metoda leczenia, która wykorzystuje metodologie i zestawy zatwierdzone przez FDA i rozwinęła się w dojrzałą metodę leczenia różnych patologii ortopedycznych i tkanek miękkich. Jak zauważono, jego bezpieczeństwo i użyteczność w odmładzaniu jajników i odwracaniu niepłodności zostało już ustalone w recenzowanych seriach przypadków.

Bezpieczeństwo stosowania niektórych allogenicznych ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych (hMSC) zostało zaproponowane i przetestowane pod kątem skuteczności w ograniczonym stopniu w niektórych wcześniejszych badaniach. Testowane produkty mają zmienne protokoły izolowania i dokumentowania zawartości oraz żywotności komórek.

Autologiczne komórki macierzyste-zrębowe (zawarte w cSVF) zostały uznane za bezpieczne i skuteczne w wielu zastosowaniach/badaniach oraz w trwających obecnie badaniach klinicznych w innych układach ciała i patologiach. Komórki te można łatwo uzyskać i wyizolować/zatężyć w układzie zamkniętym z frakcji naczyniowej zrębu pochodzącej z tkanki tłuszczowej pacjenta (tSVF). Jest to ważne, ponieważ takie tkanki są własnymi, unikalnymi genetycznie komórkami pacjenta i teoretycznie są potencjalnie bezpieczniejsze niż allogeniczne ludzkie mezenchymalne komórki macierzyste (hMSC), które są potencjalnie genetycznie obce i niosą ze sobą ryzyko zanieczyszczenia podczas przetwarzania i dostarczania.

Podejście łączone może pozwolić na wdrożenie odpowiednio większej liczby komórek, czynników wzrostu, egzosomów/mikropęcherzyków bez konieczności ekspansji hodowli.

Zawartość cSVF zawiera heterogenną populację niewyznaczonych (podobnych do macierzystych) i podtrzymujących komórek (podścieliska). Uważa się, że ta kombinacja dorosłych, autologicznych komórek wraz z komórkami zrębu oferuje ważne właściwości terapeutyczne i regeneracyjne oparte na cechach różnicowania komórkowego i parakrynnych (wydzielnicze sygnały komunikacyjne i odpowiedzi na niszę) w różnym stopniu. Uważa się, że taka sygnalizacja może stanowić własny mechanizm homeostazy i regeneracji organizmu. Proponuje się interakcję tych złożonych sygnałów biochemicznych w celu dalszej rekrutacji lub aktywacji procesów naprawczych z interakcją z natywnymi komórkami i tkankami gospodarza. Co więcej, ten proces naprawczy może stać się ważnymi specyficznymi czynnościami i potrzebami gospodarza w miejscu, w którym umieszcza się kombinację terapeutyczną. Dokładne mechanizmy leżące u podstaw tych procesów naprawczych są przedmiotem intensywnych badań.

We wszystkich przypadkach płytki krwi i materiały biokomórkowe do wstrzyknięcia do jajnika zostaną umieszczone pod konwencjonalną kontrolą obrazowania z wykorzystaniem ultrasonografii wewnątrzpochwowej. Specjalnie zaprojektowane zmodyfikowane igły zostaną wykorzystane do precyzyjnego dostarczania produktów biologicznych do docelowych tkanek miąższowych wewnątrz jajnika. Wymagana metodologia jest ogólnie bardzo podobna do pobierania oocytów w leczeniu niepłodności, które są wykonywane na całym świecie, przy minimalnym ryzyku wystąpienia działań niepożądanych miliony razy rocznie.

Wiadomo, że procedury powodują minimalny dyskomfort, a przygotowanie pacjenta waha się od braku do łagodnego wspomagającego anksjolizy. Ból po zabiegu, jeśli występuje, można skutecznie opanować za pomocą acetaminofenu. Pacjenci są obserwowani po zabiegu przez 60-120 minut, a następnie wypisywani z odpowiednimi pisemnymi instrukcjami po zabiegu, aby okresowo zgłaszać się na badania kliniczne i laboratoryjne zgodnie z protokołem przedstawionym w analizie wyników. Celem tego badania jest porównanie czasu trwania poprawy hormonalnej, klinicznej i jakości życia w trzech ramionach badania.

W przypadku mniejszości uczestniczek badania, u których jajniki nie są łatwo dostępne za pomocą ultrasonografii dopochwowej, podgrupa pacjentek może wymagać zastosowania wskazówek laparoskopowych. We wszystkich takich przypadkach interwencje będą miały miejsce w warunkach szpitalnych, gdzie Badacz przygotuje zastrzyk, a ginekolog lub inny odpowiedni specjalista chirurg przeprowadzi zabieg laparoskopowy z wykorzystaniem standardowych procedur jako wskazówek.