Rejuvenescimento ovariano usando plasma rico em plaquetas (PRP) e fração vascular estromal de tecido autólogo (tSVF) e tSVF enriquecido com células (OVAR-REJUV)

A colocação intra-ovariana de plasma rico em plaquetas (PRP) já foi demonstrada em várias séries para retornar os níveis hormonais da peri-menopausa e da pós-menopausa precoce aos níveis da pré-menopausa e ao comportamento cíclico da pré-menopausa, resultando até mesmo em gestações e partos saudáveis bebês. A intenção deste estudo é avaliar a utilidade do PRP para melhorar o estado hormonal e a sintomatologia clínica em mulheres na perimenopausa e no início da pós-menopausa e em mulheres com falência ovariana prematura não-Turner, documentando as melhorias nos parâmetros bioquímicos/hormonais , densidade óssea e qualidade de vida relacionada à saúde física e mental, bem como comparar a duração e a eficácia deste procedimento de PRP com a colocação intra-ovariana de elementos celulares biocelulares fisiologicamente ativos e citocinas contidos na fração vascular estromal derivada do tecido adiposo (tSVF).

Deve-se notar que a taxa de perda de densidade óssea em mulheres é máxima nos 12 meses anteriores e 24 meses após a menopausa. As quantidades percentuais absolutas e relativas de gordura corporal e músculos mudam de maneira adversa - com aumento da gordura e diminuição do volume muscular, com as mudanças mais dramáticas ocorrendo também no período de transição da menopausa. Este estudo, portanto, oferece o potencial para documentar a cessação mensurável da perda de densidade óssea ou redução na taxa de perda de densidade óssea em comparação com padrões conhecidos bem estabelecidos e controles históricos como resultado das intervenções relativamente inócuas propostas. A mesma tecnologia a ser usada para avaliação da densidade óssea, a absorciometria de fóton único, também será usada para quantificar a composição corporal de gordura versus músculo na linha de base e 18 meses.

A SVF pode ser ainda caracterizada como SVF celular ou SVF tecidual (cSVF ou tSVF). O tecido SVF (tSVF) é obtido por aspiração manual de microcânula de seringa fechada de pequeno volume de tecido adiposo subcutâneo (aproximadamente 10+ colheres de chá), seguida de decantação do sistema fechado para remover os fluidos infranadantes, seguida de emulsificação do remanescente até o grau necessário de homogeneidade e tamanho de partícula reduzido para permitir a injeção através de orifícios de agulha de calibre convencional. A SVF tecidual é caracterizada pela retenção de uma proporção da matriz não celular de colágeno e remanescentes vasculares finos, que juntos formam uma matriz que retém e fornece estrutura aos elementos biocelulares que estão embutidos. A SVF celular (cSVF) começa com a mesma mini-aspiração, mas é caracterizada por centrifugação em sistema fechado, seguida de digestão enzimática para isolar/concentrar a SVF celular (cSVF). Após a neutralização enzimática e enxágue, o concentrado resultante de células estaminais/estromais nucleadas viáveis ​​é preparado para colocação guiada no tecido parenquimatoso ovariano. Uma amostra de cada injetado é testada e quantificada usando citometria de fluxo a laser padrão, incluindo viabilidade e número de células dentro de cada amostra.

O estudo inclui o uso de PRP (Emcyte II Pure PRP, Flórida, EUA) PRP de acordo com as instruções do fabricante) sozinho como controle no primeiro membro de tratamento (ARM), que será volumetricamente igual aos outros injetados, para colocação guiada documentada nos ovários . Um segundo ARM comparativo composto de PRP será combinado com tSVF emulsionado (Sterile Tulip Nanofat Disposable, San Diego, Califórnia (CA), EUA). Em um terceiro ARM, o PRP mais o tSVF emulsionado serão combinados com ambos os cSVF concentrados. Este braço é para determinar os efeitos de maior concentração celular do que o obtido no segundo ARM usando os concentrados celulares obtidos usando o Centricyte 1000 (Healeon Medical Inc, Newbury Park, CA, EUA). Os resultados primários para cada um desses procedimentos opcionais serão comparados e avaliados quanto à segurança, eficácia clínica em melhorar o retorno da função ovariana para determinar a metodologia preferida para alcançar resultados máximos.

As características basais e monitoradas do paciente são as seguintes:

• O estado basal de todos os pacientes será determinado utilizando índices bioquímicos relevantes, incluindo níveis séricos de Hormônio Folículo Estimulante (FSH), Hormônio Anti-Mulleriano (AMH), Hormônio Luteinizante (LH), Estradiol (E2) e Progesterona (PRG). Estes serão repetidos em 30 e 90 dias e, a seguir, a cada 3 meses por mais 15 meses, totalizando 18 meses de acompanhamento. Painel de sangue abrangente (SMA 12), hemograma completo (CBC), perfis lipídicos e índices de coagulação serão obtidos na linha de base e repetidos (sem índices de coagulação) em 12 meses.
• À medida que a densidade óssea começa a diminuir a uma taxa significativa no período peri-menopausa, uma determinação da densidade óssea com absorciometria de fóton único será obtida na linha de base e novamente aos 12 e/ou 18 meses. As proporções de gordura/músculo da composição corporal serão avaliadas com a mesma tecnologia na mesma sessão.
• A qualidade de vida relacionada à saúde física e mental será avaliada com as pesquisas de qualidade de vida na linha de base, 6 e 12 meses.
• O volume ovariano será avaliado no início do estudo por ultrassonografia endovaginal, juntamente com o tamanho e o número de folículos presentes e, a seguir, a cada 6 meses.
• Registro diário dos ciclos menstruais - frequência/intervalo, dias e duração.

No ARM 1, apenas o PRP será colocado dentro dos ovários. No ARM 2, o PRP será combinado com o tSVF. No ARM 3, tSVF será combinado com cSVF e PRP. Volumes combinados de injetado serão usados ​​em cada ARM para evitar questões de interferência potencial no parênquima ovariano impactando o resultado devido a efeitos variáveis ​​de volume. Os resultados primários para cada um desses braços serão comparados, informando-nos sobre uma metodologia preferida para avaliação posterior e, finalmente, prática clínica.

O plasma rico em plaquetas autólogo é uma modalidade de tratamento estabelecida que utiliza metodologias e kits aprovados pela FDA e se tornou uma modalidade de tratamento madura para uma variedade de patologias ortopédicas e de tecidos moles. Conforme observado, sua segurança e utilidade no rejuvenescimento ovariano e na reversão da infertilidade já foram estabelecidas em séries de casos revisadas por pares.

A segurança do uso de certas células-tronco mesenquimais humanas alogênicas (hMSC) foi proposta e limitadamente testada quanto à eficácia em alguns estudos anteriores. Os produtos testados possuem protocolos variáveis ​​no isolamento e documentação de conteúdo e viabilidades celulares.

As células estaminais autólogas (contidas no cSVF) foram relatadas como seguras e eficazes em muitas aplicações/estudos e em ensaios clínicos atualmente em andamento em outros sistemas e patologias do corpo. Essas células são facilmente obtidas e isoladas/concentradas em um sistema fechado a partir da fração vascular estromal derivada do tecido adiposo (tSVF) do paciente. Isso é importante, pois esses tecidos são células geneticamente únicas do próprio paciente e, em teoria, potencialmente mais seguras do que as células-tronco mesenquimais humanas alogênicas (hMSCs), que são potencialmente geneticamente estranhas e correm o risco de contaminação no processamento e entrega.

Uma abordagem combinada pode permitir a implementação de um número adequadamente maior de células, fatores de crescimento, exossomos/microvesículas sem a necessidade de expansão da cultura.

O conteúdo do cSVF contém uma população heterogênea de células não designadas (semelhantes a tronco) e de suporte (estromais). Esta combinação de células adultas autólogas, juntamente com células estromais, oferece importantes qualidades terapêuticas e regenerativas com base em características de diferenciação celular e o parácrino (sinais de comunicação secretora e respostas ao nicho) em graus variados. Acredita-se que tal sinalização possa constituir o próprio mecanismo do corpo para homeostase e regeneração. A interação desses sinais bioquímicos complexos é proposta para recrutar ou ativar processos reparativos com interação com as células e tecidos nativos do hospedeiro. Além disso, esse processo reparador pode se tornar importantes atividades e necessidades específicas do hospedeiro no local em que a combinação terapêutica é colocada. Os mecanismos precisos subjacentes a esses processos reparativos estão sob intensa investigação.

Em todos os casos, as plaquetas e os materiais biocelulares para injeção intra-ovariana serão colocados sob orientação de imagem convencional utilizando ultrassonografia endovaginal. Agulhas modificadas especialmente projetadas serão utilizadas para fornecer com precisão os produtos biológicos aos tecidos parenquimatosos intra-ovarianos direcionados. A metodologia necessária é muito semelhante à recuperação de oócitos em tratamentos de infertilidade, que são realizados em todo o mundo, com risco mínimo de efeitos adversos milhões de vezes por ano.

Os procedimentos são conhecidos por resultar em desconforto mínimo, com preparação do paciente variando de nenhum a ansiólise de suporte leve. A dor pós-procedimento, se houver, pode ser efetivamente controlada com acetaminofeno. Os pacientes são observados após o procedimento por 60-120 minutos e, em seguida, recebem alta com instruções adequadas por escrito após o procedimento para retornar periodicamente para acompanhamento clínico e laboratorial de acordo com o protocolo descrito na análise dos resultados. O objetivo deste estudo busca comparar a duração da melhora hormonal, clínica e da qualidade de vida entre os 3 braços do estudo.

Para a minoria das participantes do estudo nas quais os ovários não são facilmente acessíveis por ultrassom endovaginal, um subconjunto de pacientes pode exigir o uso de orientação laparoscópica. Em todos esses casos, as intervenções ocorrerão em ambientes hospitalares, com o investigador preparando a injeção e cirurgiões ginecológicos ou outros cirurgiões especializados adequados realizando o procedimento laparoscópico utilizando procedimentos padrão como orientação.