卵子の可能性を解き放つ: エクアドルで幼児の栄養を改善

目的

目的 1: エクアドルの先住民コミュニティの幼児の多量栄養素および微量栄養素の状態について、6 か月間の毎日の卵の消費の有効性をテストします。

1a.微量栄養素バイオ マーカーの血清濃度を測定: コリン。ベタイン;そしてビタミンB12。

1. b.多量栄養素バイオマーカーの血清濃度を測定します: 脂質 (合計遊離およびエステル化)。そしてアミノ酸。

   目的 2: 補完食期間中の態度、信念、および卵の使用を特徴付けます。

2. a.エクアドルの幼い子供の食生活における既存の態度、信念、および卵の使用について説明してください.

2b.幼い子供たちの毎日の卵消費の受容性と耐性を監視します。

2c。世話をする人が卵子を準備し、幼い子供たちに毎日与えようとする意欲を評価します。

背景と意義

世界中で、1 億 6,500 万人の子供が発育阻害の影響を受けており、その一部は補完食期間中の主要栄養素および微量栄養素の欠乏に起因しています。生後6ヶ月から24ヶ月と定義されています。 推定 2 億人の子供が、栄養不足、特に栄養摂取不足のために、発達の可能性を十分に発揮できていません。 卵は、貧しい国に住む幼い子供たちの食事に欠けていることが知られているこれらの重要な栄養素のいくつかを提供しますが、乳児や幼児の栄養にはほとんど活用されていません.

卵は、必須脂肪酸、タンパク質、および多くの重要な微量栄養素を、他の動物性食品と同等以上のレベルで提供しますが、比較的手頃な価格です. 卵は、他のタンパク質と比較されるアミノ酸プロファイルを持つ完璧なタンパク質源と考えられています. 卵は、神経伝達物質の合成におけるアセチルコリンの重要な前駆体であるコリン、細胞膜シグナル伝達に必要なリン脂質、およびホモシステイン生成経路におけるメチル基の供与にも非常に集中しています. コリン欠乏症の有害な結果の証拠は主に動物研究から得られますが、いくつかの研究では、コリンまたはその代謝物と子供の健康と発達の悪影響との関連が示されています. 幼い子供たちの卵の消費量がカウンセリングによって改善できることを示した研究は1つだけです.

卵は食事の多様性に貢献します。 これらは、乳幼児の摂食慣行を評価するための WHO 指標で最小の食事の多様性の指標を評価するために使用される 7 つの食品グループに含まれる、3 つの動物性食品グループの 1 つです。 しかし、特に多くのアフリカ諸国だけでなく、ラテンアメリカやカリブ海諸国でも、子供の栄養を改善する可能性に比べて、幼児の食事にはあまり使用されていません. 生後6～8.9ヶ月の子供の前日の卵消費率は、アフリカ、アジア、ラテンアメリカでそれぞれ7.3%、15.8%、22.8%でした。 生後 12 ～ 23.9 か月の子どもの消費率は、アフリカでわずか 13.4%、アジアで 33.0%、ラテンアメリカとカリブ海で 41.8% にまで増加しました。

これまでのすべての証拠は、卵が幼児の栄養、特に主要な主要栄養素と微量栄養素のレベルを改善する可能性に比べて、補完食品として十分に活用されていないことを示唆しています. 開発途上国の子供の栄養を改善するために、食事からの卵摂取の有効性をテストする研究が必要です。 補完的な給餌期間中の卵の態度、信念、および使用を理解することも必要です。

意義。 卵が幼児の栄養状態を改善する可能性があるにもかかわらず、私たちの知る限り、開発途上国に住む幼児の微量栄養素の状態を改善するための卵の消費の有効性をテストするランダム化比較試験はなく、卵関連の介入からの証拠はほとんどありません. また、補完食期間中の母親やその他の介護者による卵の態度、信念、および使用に関する証拠も非常に限られています。 したがって、提案された研究は、ランダム化比較試験を通じて、微量栄養素バイオマーカーの血清濃度に対する卵の摂取の影響を調べることにより、文献の重要なギャップを埋めるでしょう。コリン;ベタインおよび多量栄養素のバイオマーカー: 脂質 (合計遊離およびエステル化)。エクアドルの貧しい農村地域の幼い子供たちのタンパク質栄養。 質的研究を通じて、提案された研究は、補完的な摂食期間中の母親や他の介護者による卵子の態度、信念、および使用にも光を当てます.

実験計画と方法

キトのサンフランシスコ大学 (USFQ) は、すべてのフィールド活動を調整します。 並行デザインによるランダム化比較試験が適用されます。 この研究には、合計 180 組の母子ペアが登録されました。対照群では 90 組。卵介入群では90人。 すべての乳児の包含基準は次のとおりです。6〜8か月。健康（発熱、先天性心疾患、卵アレルギーがない）;シングルトンの誕生;重度の栄養失調ではない [体長に対する体重 z (WLZ) > -3)。 180 人の母親、または母親が不在の場合は、乳児の他の保護者 (父親、祖父母、叔母/叔父、兄弟など) が登録されます。

参加者 (募集、審査、および同意プロセス)。 母親/主介護者と子供は、エクアドルのコトパクシ州のパストカレ教区で募集されます。そこでは、この年齢カテゴリーの十分な数の乳児を確保するための形成的調査が行われました。 サンプルサイズに確実に到達するために、1 年間にわたってローリング入学プロセスが行われ、可能性として、募集を隣接する小教区に拡大する予定です。 参加者は、地元の指導者の支援とコミュニティの利害関係者の積極的な関与により、参加型アプローチを通じて募集されます。 募集の前に、フィールドチームが標準化された手法を使用して介護者と信頼関係を築く初期段階があります。 母親（または他の主介護者）に連絡を取り、子供たちと一緒に研究に参加するよう招待します。 研究スタッフは、研究の理論的根拠、すべての研究手順、およびそのリスクと利点を口頭で説明し、母親に子供と一緒に参加するよう勧めます。 その後、適性検査が行われます。 母親/主介護者に提示されるスクリーニングの質問には、次のものが含まれます。

• 何歳ですか？
• 子供の誕生日は？
• 子供は健康で、発熱や先天性心疾患はなく、重度の栄養失調もありませんか?
• 子供は、卵、発疹、蕁麻疹、呼吸困難を食べることに対して何か反応がありますか?
• この子の誕生はシングルトンの誕生でしたか。彼/彼女は双子や三つ子などを持っていません.

主介護者が子供が栄養失調であると報告した場合、および/または子供がやせているように見える、または浮腫などの他の症状がある場合、子供の体重と身長が測定され、体重対身長の Z スコアが WHO から決定されます。成長基準（2006）。

子供の母親または主な養育者には、読んで署名するためのスペイン語の書面によるインフォームド コンセント ステートメントが渡され、子供に代わって同意と同意を示します。 母親/主介護者が 18 歳未満の場合は、両親または保護者からインフォームド コンセントのプロセスが求められます。 識字能力が限られている参加者には、ステートメントを読んでもらうオプションが提供されます。 この間、介護者は研究の性質について質問するように招待されます。 潜在的な参加者は、参加するかどうかを決定するために約 1 週間かかります。したがって、家族や友人と話し合う機会があります。

フィールド手順を研究します。 子供たちは、コンピューターで生成された数列プログラムを通じて、2 つの比較グループのいずれかに 1:1 の比率で無作為に割り付けられます。 2) 卵の補給。

ベースライン調査は、最初に指定された日に、コミュニティセンター、ヘルスケアポスト、または保育園のすべての母親/主介護者に実施されます。 世帯レベルの社会経済、人口統計、水、衛生、衛生に関する情報が収集されます。 子供の食事摂取量データは、一般的に使用される補完食品の食物頻度アンケートを使用して収集され、子供と家庭の卵の消費パターンに関する的を絞った質問が補足されます。 罹患率は、2週間のリコールを使用して評価されます。特に、この集団での有病率が高く、卵アレルギーに関連する可能性のある症状を考慮して、呼吸器感染症に焦点を当てています. その後、国際プロトコルを使用して、子供の身長と体重の人体測定が行われます。 経験豊富で設備の整ったエクアドルの研究所、NETLAB の採血専門医が、子供から 3 ml の血液を採取します。 子供には麻酔クリームを使用します。

卵子補給グループの母親には週に 1 度の卵子が与えられ、子供には 1 日 1 個の卵子を与えるように指示されます。 衛生慣行と卵の取り扱いと準備に関して、追加のメッセージが伝えられます。 卵は冷蔵する必要はありませんが、涼しい場所に保管する必要があります。 対照群の母親/介護者には、介入研究の完了後、6 か月間の卵のバウチャーが提供されます。 すべての母親は、必要に応じてベースラインおよびエンドラインの訪問と質的評価を含む研究イベントへの参加を追跡する出席カードを受け取ります。 研究の完了時に、すべての母親は、彼らの貢献に感謝して、ささやかなパーソナルケアギフト（ローションまたは香水）を受け取ります.

意欲を高めるワークショップは、研究コーディネーターとチームによって定期的に開催され、参加者からフィードバックを受け取り、研究参加の理論的根拠を提供し続けます。 これらのワークショップは、介護者を研究に効果的に関与させ、フォローアップの損失を最小限に抑えることができます。 同様に、コミュニティのリーダーや医療従事者との定期的な会議が開催され、研究の進捗状況と調査結果についてコミュニケーションと対話が行われます。

卵はパストカーレで購入し、調査チームが毎週家族に配布します。 (食糧農業機関 (FAO) は、この研究に関連する可能性のある家禽開発プロジェクトを実施するために USFQ を支援する可能性があります。 農業省の普及員からの技術支援を受けて、パストカーレの家族は産卵用のニワトリを受け取り、飼育します。) この研究のための卵は、これらの世帯から購入され、すでに確立された卵生産プロジェクトは、障害のある個人を支援するために教区議会を通じて開発されます。

研究コーディネーターおよび調査チームは、携帯電話、面会、および家族や友人を通じてフォローアップできなくなった母親/主介護者に連絡を取り、研究に戻るよう促し、彼らが去った理由に関する情報を収集します。研究。

栄養バイオマーカー: この研究で評価される栄養バイオマーカーには、ビタミン B12、コリン、ベタイン、脂質、アミノ酸が含まれます。 エクアドルのキトにある NETLAB は、次の責任を負います。1) 血液サンプルの収集。 2) コリン/ベタイン、脂質およびアミノ酸の抽出プロセスを処理および完了する。 3) これらのサンプルをワシントン大学生物医学質量分析リソース施設に発送する。 4) ビタミン B12 のアッセイを完了します。 訓練を受けた採血専門医が定期的にパストカーレとその周辺の教区を訪れ、血液サンプルを採取します (各子供から 3 mL)。 エチレンジアミン四酢酸 (EDTA) 血漿は、参加者 ID 番号のみが記されたバキュテナー チューブに血液を採取することによって得られます。 サンプルは氷上に置かれ、キトの NETLAB 施設に輸送されます。

サンプルが処理され、コリン、ベタイン、脂質、およびアミノ酸の抽出が完了します。 コリンおよびベタイン検体の場合、血漿のアリコートを d9-コリンおよび d9-ベタインを含むアセトニトリルと混合します。 アセトニトリル抽出物を遠心分離し、上清をマイクロ遠心チューブに移し、窒素ガス下で完全に乾燥させます。 マイクロ遠心管には、参加者 ID 番号と収集日が記載されています。 脂質とアミノ酸を処理するための抽出プロセスも完了します。 これらの抽出されたサンプルは、Globalex 運送会社によってミズーリ州セントルイスにあるワシントン大学生物医学質量分析リソース施設にドライアイスで出荷されます。 コリンおよびベタインのアッセイは、LC/MS/MS プロトコル (付録 1) を使用してテストされます。 残りのサンプル アリコートは、-80 ℃ で凍結されます。ビタミン B12 は、競合化学発光酵素イムノアッセイ固相を使用して後でテストされます。

定性調査。 ここでは、焦点を絞った民族誌学研究 (FES) に使用されたものと同様の定性調査手法が適用されます。 定性的な方法は、根拠のある理論に基づいています。 根拠のある理論は、収集されたデータの体系的な分析から理論を構築するための帰納的な方向性を持っているという点で、質的分析のユニークな形式です。 詳細なインタビューとフォーカスグループは、母親、祖母、その他の介護者、および地元の医療提供者、コミュニティリーダー、卵生産者と実施され、幼児の栄養に対する態度、認識、および卵の使用を理解します.

構造化された観察は、環境要因、鶏の飼育慣行、補完的な食品貯蔵、卵の準備と給餌の慣行を調べるために、同意した介護者と育児センターの農場で行われます。 さらに、収集した定性データの分析には、3 つの方法の組み合わせに従います。仮説的推論;およびスキームの生成。 この 3 つのうち、コアとなる方法は 3 段階のコーディングです。 まず、オープン コーディングは、個々の応答の基本的な概念を識別します。 第二に、応答のパターンから出現し、カテゴリとプロパティ間の関係を生成するカテゴリとプロパティの生成を通じて、軸コーディングが開発されます。 第三に、選択的なコーディングは、主要なトピックとそれらの間の相互関係を統合して洗練します。 コーディングは USFQ によって行われ、UCD と PAHO の調査員のサポートを受けて、品質管理のために三角測量が行われます。

データ管理。 USFQ は、Pastocalle および NETLAB (UC-Davis を使用) で収集されたデータのデータ管理を担当し、ワシントン大学は、Biomedical Mass Spectrometry Resource Facility で生成されたデータを担当します。 エラーを最小限に抑え、正確で包括的な報告の可能性を高めるために、データ入力は早期に開始され、研究全体で継続されます。 潜在的なエラーまたはデータの欠落が特定された場合、管理者は調査員および介護者/母親に問い合わせて、適切な回答またはデータ セット内の説明を提供します。 入力エラーをチェックするために、調査のサブセットに対して二重データ入力が行われます。

サンプルサイズと統計分析。 サンプル サイズは、ビタミン B12 補給に関する他の以前の調査結果と乳児間のビタミン B12 状態の変動性に基づいて、6 か月間にわたる 59.4 pmol/L の血漿ビタミン B12 濃度の仮説上の変化 (対照との差の差) に基づいて推定されました。 . この栄養素は、研究される他の栄養素とは対照的に、変動性と卵の消費による潜在的な影響を推定するのに十分なデータが利用可能であったため、サンプルサイズの計算に選択されました. 20% の離職率を仮定すると、グループごとに 90 人の子供が必要になると見積もっています。

記述統計は、最初にサンプルの特性、および一次および二次結果を調べるために適用されます。 次に、カイ 2 乗検定や t 検定などの単変量検定を適用して、試験群全体の特性を比較し、ベースラインとエンドラインでの結果変数の断面の違いを調べます。 一次バイオマーカーの結果（継続的な血清/血漿栄養濃度マーカー）と二次成長（LAZ、WAZ、WLZ）、および罹患率の結果（下痢の日数）の縦断的モデリングは、一般化最小二乗法（GLS）とランダム効果を使用して実施されます。 ロジット モデルを適用して、しきい値の結果 (栄養不足、発育阻害、低体重、消耗、呼吸器感染症など) の調整オッズを調べます。 卵の有効性に関するすべての推論分析では、intention-to-treat が使用されます。 定量的データ分析は、STATAソフトウェア（バージョン11.1; StataCorp、College Station、TX）を使用して実行されました。

定性的なデータ分析のために、インタビューのトランスクリプトが Nvivo10 ソフトウェアにアップロードされ、テーマ用にコード化されます。 トップラインのテーマは、インタビューでの参加者の回答に応じて、より詳細なカテゴリに細分化されます。 これらのカテゴリとテーマを分析すると、質的調査結果の基礎となるインタビュー データのパターンが明らかになります。 主要なテーマを分析する 2 つの研究部門におけるインタビューのサブセットのフレームワーク マトリックス分析を適用して、研究部門間の回答の体系的な違いを調査します。

微量栄養素の摂取量を基準レベルの妥当性と比較して測定するために、完全確率アプローチが使用されます。 この方法では、しきい値レベルを上回る摂取量と下回る摂取量を推定する単純なカットポイント アプローチと比較して、摂取量の分布全体にわたって不十分なリスクをより包括的に推定できます。 子供の微量栄養素摂取量は、参照分布の推定平均必要量 (EAR) を差し引き、参照分布の SD で割ることによって標準化されます。 得られた数値を標準正規分布と比較して、不十分な確率、つまり標準正規曲線の右下の領域を取得し、サンプル全体で平均します。

対象集団のプロフィール。 この研究の対象集団は、エクアドルのコトパクシ州にある先住民コミュニティが主に住むパストカル郡の生後 6 ～ 8 か月の乳児です。 国民の健康と栄養に関する調査である Encuesta Natcional de Salud y Nutricion (ENSANUT-ECU) の調査結果によると、全国の 0 ～ 5 歳の子供の 25.3% が発育阻害 (HAZ<-2) でした。 この研究の他の指標は、エクアドルの先住民の幼児の栄養上の脆弱性をさらに示しました。 貧血 (41.6%)、亜鉛欠乏症 (32.4%)、およびビタミン A 欠乏症 (19.3%) の有病率はすべて全国平均を上回り、6 ～ 11 か月の年齢区分で最も高かった。 ENSANUT-ECU は、タンパク質、鉄、および亜鉛について、一般集団における高レベルの栄養摂取不足を発見しました. 米は食事中のエネルギーの約 3 分の 1 (32.8%) を占め、動物性食品のレベルは比較的低くなっています。 USFQ は、微量栄養素粉末の有効性を調べる Chispaz 研究を実施しました。この研究はPastocalleで行われました。 このように、コミュニティ内の研究に対する理解と評価はすでに存在しています。

リスクと利点。 この研究に関連するリスクは最小限ではありません。 卵に対するアレルギー反応のリスクは低いです。幼児ではわずか 1 ～ 2% であると予想されます。 卵を食べた直後に蕁麻疹が出る軽度のケースがほとんどです。 既知の卵アレルギーのある子供は研究から除外され、アレルギー反応の症状を示す子供は治療のために紹介され、将来の研究への参加から除外されます。 この研究のための採血に関連する小さなリスクがあります。 サンプルを収集する研究チームは、人間の生物学的標本の安全な取り扱いについて十分な訓練を受けており、手袋、滅菌器具、およびアルコール綿棒の使用に関する厳格な衛生プロトコルに従って、領域を浄化します。 麻酔クリームも同様に、子供の痛みと母親/介護者の心理的苦痛を最小限に抑えるためのオプションとして検討されています. 守秘義務を守るため、保護者との面談は非公開の環境で行います。

子供たちは、この研究への参加を通じて、栄養価が高く、栄養価の高い食品である卵の消費による栄養状態の改善の可能性を通じて、直接利益を得るでしょう. この研究には遅延介入デザインが含まれており、最終的にはすべての参加者が卵子介入を受ける機会があります。 したがって、すべての参加者は、高品質の食品を受け取ることで利益を得る機会があります。 幼児の栄養を改善するための食品ベースの持続可能なアプローチに関して得られた知識に関して、社会に潜在的な利益があります。 世界的に、栄養プログラムと政策は、単一の栄養素または複数の栄養素の補給、微量栄養素の粉末、または輸入された加工補完食品の使用に大きく依存してきました. このプロジェクトは、食品ベースのアプローチをテストすることを目的としており、幼い子供に適した生物学的に利用可能なマトリックスで卵を介して栄養素を提供します. さらに、卵は地元で購入され、地域の経済発展にプラスの影響を与える可能性があります。

プライバシーと機密保持。 同意、インタビュー、人体測定、および採血のプロセスは、コミュニティ センター、ヘルスケア ポスト、または子供の保育園で行われます。 スペースは十分に広く、機密性が確保されています。 これらの設定ごとに個別のプライベート スペースがインタビューとデータ収集用に指定されます。 プライバシーの不必要な侵害を避けるために、子供の栄養に関する質問のみが求められます。 母親/主介護者が必要に応じて追加の質問をできるように、各同意と面接プロセスに追加の時間が割り当てられます。 また、母親や介護者にとって便利なアクセスを容易にするために、家庭に近接して配置されています。 場合によっては、フィールドチームが上記の目的で参加者の自宅を直接訪問します。

インフォームドコンセントフォームには、母親/介護者側の同意のオプションとして、将来の研究のためのデータと血液サンプルの使用の可能性についての言及が含まれます。 ベースライン調査には 2 つの質問が含まれます。最初の質問は、母親/介護者が自分のデータを将来の研究に使用することに同意するかどうかを尋ねるもので、2 つ目は、子供の血液を将来の研究に使用する可能性があるかどうかを母親/介護者に尋ねるものです。

データは紙のフォームで収集され、Instituto de Investigacion en Salud y Nutricion (ISYN) オフィスの施錠されたキャビネットに保管されます。 すべての参加者には、すべての研究フォームに記載される一意の識別子が割り当てられます。 個人を特定できる情報へのアクセスは、研究調査員の間で、参加者のフォローアップと追跡の目的で、PI、上級研究チーム、およびフィールド チームのみに制限されます。 データは USFQ の調査チームによって入力されます。 暗号化された生データ ファイルは、パスワードで保護されたストレージ デバイスまたはその他の電子データ転送メカニズムを使用して、ワシントン大学に定期的に転送されます。 匿名化されたデータセットは共同 PI と共有されます。 エクアドルでは、この研究は、USFQ の IRB (Comité de Bioética) と公衆衛生省によって事前に承認される予定です。