기능성 소화불량 마이크로바이옴 연구

마이크로바이옴 분석

대변 ​​샘플 및 8개의 점막 생검(하행 십이지장)을 각 피험자로부터 얻을 것입니다. 표준 실험실 기술에 따라 샘플을 처리하고 DNA를 분리합니다.16S 환자 샘플 내 미생물 군집의 rDNA 서열 분석은 당사의 HiSeq 1500 신속 실행 기술을 활용하여 분석됩니다. 우리는 2 X 150 bp paired end 시퀀싱을 수행하여 예외적인 적용 범위를 제공합니다(판독 > 30,000). 현재 Illumina HiSeq 1500에 최적화된 방법인 16s RNA(E. coli 515-806)의 V4 영역을 시퀀싱합니다. 또한 샘플의 이중 제어 분석을 제공하기 위해 16s RNA의 V3 영역을 동시에 시퀀싱할 것입니다. 확인 PCR은 적절한 경우에 사용됩니다. 데이터는 식별된 각 박테리아 종에 대한 총 개수로 보고됩니다.

염증 세포 밀도

이전에 헤마톡실린 및 에오신으로 염색된 일상적인 조직학 슬라이드는 호산구 밀도 측정에 활용됩니다.

IHC 기술은 비만 세포 밀도를 결정하는 데 활용됩니다. 직렬 3-μm 파라핀 절편은 공기 건조되고 슬라이드에 열 고정됩니다. 섹션은 크실렌과 요오드로 파라핀을 제거하고 등급이 매겨진 일련의 알코올로 재수화합니다. 트립타제 단클론 마우스 항인간 비만 세포 트립타제 항체(클론 AA1, Dako, Carpinteria, CA)를 활용하여 섹션은 자동 Dako Autostainer 3400에서 양고추냉이 퍼옥시다제에 접합된 스트렙타비딘이 포함된 Dako의 LSAB+ 키트를 사용하여 염색됩니다.

각 세포 유형의 밀도를 결정하기 위해 전체 표본을 스캔하여 가장 많이 관여하는 주관적 영역을 결정합니다. 밀도는 5개의 연속적인 고전력 필드(400X 배율) 내의 셀 수를 계산하여 결정됩니다. 세포/hpf로 표현되는 최고 및 평균 세포 밀도가 결정될 것이다. 이것은 연구가 끝나기 전에 완료됩니다.

면역조직화학(IHC)

IHC 염색이 수행될 것이며 진행 중인 파일럿 연구의 결과에 따라 각각 DCLK1, BDNF, TRPV1 및/또는 CRH-R1을 포함할 수 있습니다. 염색 강도는 평균 IHC 신호 강도(즉, 0= 없음, 1= 약함, 2= 보통, 3= 강함) 및 양성 면역반응성을 보이는 조직 세포 또는 섬유의 백분율. 최종 면역반응성 점수가 양성 세포의 백분율 곱하기 평균 염색 강도의 곱과 동일한 정액-정량 점수화 시스템이 적용될 것이다. 양성 세포 또는 섬유의 백분율은 다음과 같이 등급이 매겨집니다: 0= 음성-10%, 1= 11-33%, 2= 33-66% 및 3= > 67%. 면역 반응성은 합산 점수 범위가 2-6이고 음성이면 0-1인 경우 양성으로 간주됩니다. 다른 IHC 염색은 문헌에 표시된 대로 관련성이 있는 경우 수행할 수 있습니다. 이것은 연구가 끝나기 전에 수행됩니다.

BASC의 T-점수는 데이터 수집 양식에 대한 이 연구의 일부로 수집됩니다.

이 정보는 환자의 심리사회적 정보를 평가하는 데 사용됩니다. 이 정보는 연구 종료 전에 수집 및 기록됩니다.