트롬빈 생성 분석을 위한 표준화된 프로토콜의 평가

주요 목표 목표는 정교한 표준화 프로토콜을 사용하고 대규모 전향적 다기관 연구를 현실화함으로써 TGA-CAT(트롬빈 생성 검정 보정 자동 혈전도) 방법에 대한 실험실 간 변동성을 더욱 개선하는 것입니다.

프로젝트의 목표는 다음과 같습니다.

• 강화된 표준화된 TGA-CAT 프로토콜을 평가하여 실험실 간 가변성을 결정합니다.
• 중증 A형 혈우병 환자에게 재조합 FVIII 제품(Advate)을 투여하여 TGA-CAT 방법의 실험실 간 가변성이 영향을 받는지 평가하기 위해
• 중증 A형 혈우병 환자에게 지속형 FVIII 제품(Adynovate)을 투여함으로써 TGA-CAT 방법의 실험실 간 가변성이 영향을 받는지 평가하기 위해
• 실험실 간 가변성을 개선하기 위해 데이터의 정규화를 통해 세 가지 기준 혈장의 능력을 평가합니다.

소개 TGA CAT 방법은 출혈 장애의 진단 및 관리(1, 2), 과응고성 검출(3, 4), 경구용 항응고제 모니터링 및 특성화(5, 6) 등 다양한 목적에 유용함이 입증되었습니다. 이러한 연구의 대부분은 단일 센터 연구이며 결과를 추가로 검증하기 위해서는 대규모 전향적 다중 센터 연구가 필요합니다. 이러한 다기관 연구는 방법의 표준화 부족으로 인해 생성하기 어려운 것으로 입증되었습니다. 지난 몇 년 동안 여러 기사에서 TGA-CAT 방법에 대한 실험실 간 가변성이 큰 문제를 철저히 해결된 표준화 프로토콜을 제시함으로써 해결했습니다. 방법 자체와 사전 분석 요소, 결과 정규화를 위한 기준 혈장(RP)의 사용에 초점을 맞춥니다. 한 기사는 결과의 정규화를 위해 RP를 선택하면 실험실 간 변동성을 크게 줄일 수 있으며 특정 RP가 그렇게 할 수 있는 더 나은 능력을 가지고 있음을 보여주었습니다(7).

최근 반감기가 연장된 많은 재조합 인자 VIII(rFVIII) 및 IX(rFIX) 약물이 개발되어 시장에 출시될 예정이거나 출시되었습니다. 연장된 약물 활성의 길이는 환자마다 다르며 환자의 약물 투여를 개별적으로 조정할 필요성이 분명합니다. 트롬빈 생성은 최적의 약물 투여를 조정하고 각 개인에 대한 약물의 효과를 모니터링하는 데 탁월한 도구임이 입증될 수 있습니다.

방법 및 재료 트롬빈 생성 트롬빈 생성은 Hemker 등에 의해 기술된 방법(8)에 따라 측정될 것이다: 보정된 자동 혈전도(CAT, Thrombinoscope BV, Maastricht, the Netherlands).

시약 PPP-시약 LOW(1pM), PPP-시약(5pM), 트롬빈 ​​교정기 및 FluCa-키트(TS31.00, TS30.00, TS20.00 및 TS50.00, Thrombinoscope BV, Maastricht, The Netherlands)가 테스트에 사용됩니다.

샘플 정상 혈장, 저응고성 및 과응고성 혈장의 세 가지 다른 혈장을 검사합니다. 정상 및 과응고성 혈장은 3명의 기증자로부터 수집되고 저응고성 혈장은 4명의 기증자로부터 수집됩니다. 저응고성 혈장은 Malmö Coagulation Unit에서 정기적으로 치료를 받는 5명의 혈우병 A(HA) 환자에게서 한 번에 10개의 4.5mL 구연산 혈액 튜브를 채취하여 수집합니다. 정상 혈장은 같은 부서의 3명의 동료로부터 수집되며, 각 사람은 4.5mL 구연산 혈액 튜브 13개를 기증합니다. 과응고성 혈장은 3명의 건강한 지원자로부터 준비될 것이며, TGA CAT 매개변수 값이 4.5mL 구연산 혈액 튜브 13개를 채취하여 중앙값의 2SD보다 큰 것으로 나타났습니다. FVIII-농축액, Advate™ 및 지속형 Adynovate™를 각각 2회 개별 투여한 중증 HA 환자 1명의 혈장도 테스트할 예정입니다. 정보에 입각한 동의 후 환자는 72시간 동안 정기적인 프로필락시스 용량을 복용하지 않도록 요청받을 것입니다. 환자에게 각각 30U/kg의 Advate™ 및 Adynovate™를 투여합니다. 모니터링 샘플은 주입 후 1시간, 8시간, 24시간, 36시간 및 48시간(Advate™) 및 1시간, 24시간, 36시간, 48시간 및 72시간(Adynovate™)에 채취됩니다. 각 시점에서 4.5mL 혈액 튜브 3개를 채취합니다.

1:5로 희석된 Siemens Control Plasma P는 저응고성 RP로 사용되며, HemosIL 보정 혈장(Instrumentation Laboratory, Bedford, Ma, USA)은 표준 RP 및 과응고성 혈장 PS-DP(단백질 S 결핍 혈장)로 사용됩니다. (Enzyme research laboratories, South Bend, In, USA)를 사용한다.

통계 분석 원시 데이터는 Malmö의 Skåne 대학 병원 응고 부서에서 수집 및 분석됩니다. 각 참여 센터는 Bland-Altman 바이어스 플롯이 사용되는 일치 테스트에서 Malmö 응고 장치와 일치됩니다. 평균, 표준 편차(SD) 및 변동 계수(CV%)는 정규화가 있거나 없는 각 센터에 대해 계산되어 표에 표시됩니다. Advate/Adynovate 소거 프로필이 그려지고 평행 곡선에 대한 일반 테스트를 포함하는 분산의 다변량 반복 측정 분석이 소거 프로필의 중심 간 차이를 평가하는 데 적용될 것입니다.

연구 설계 이 연구의 목적은 고도로 표준화된 프로토콜을 사용하여 TGA-CAT 수행 TGT의 실험실 간 가변성을 평가하고, 데이터 정규화를 위한 RF 사용이 결과의 가변성에 미치는 영향과 장기간 모니터링에서 TGA-CAT의 유용성을 평가하는 것입니다. FVIII 약물 투여. 참여 센터의 모든 형광 측정기는 서비스를 받아야 하며 연구 시작 전에 온도를 37C로 보정해야 합니다. 최신 소프트웨어 버전이 설치되어 있어야 합니다(Thromboscope BV, Maastricht, The Netherlands, 버전 V5.0.0.742). 모든 실험실 장비, 피펫, 수조, 정수기 등은 보정이 필요합니다. 연구에 필요한 모든 혈장, TGA-CAT 시약은 Malmö의 Coagulation Unit에서 모든 참여 센터에 투여 및 배포됩니다. 플레이트 설정 구성표 파일과 중요한 사전 분석 및 분석 단계를 다루는 비디오 파일이 포함된 USB 메모리 스틱도 샘플 및 시약과 함께 제공됩니다. 3개의 풀링된 혈장(정상, 저응고 및 과응고 가능), 3개의 RF, 5개의 Adynovate 및 5개의 Advate 모니터링 샘플이 USB 메모리 스틱에 제공된 계획에 따라 각 참여 센터에서 5일에 5회 실행됩니다. 트리거, PPP-시약 LOW(1pM) 및 PPP-시약(5pM). RF 및 시약 사용을 최대화하기 위해 매일 두 번의 테스트 실행이 예정되어 있습니다. 세 가지 다른 유형의 RF를 테스트하는 이유는 예를 들어 저응고성 RF에서 저응고성 플라즈마(9)를 사용할 때 이전 연구 결과가 가변성의 더 나은 감소를 암시한다는 사실입니다.