Ocena śródoperacyjnej laserowej endomikroskopii konfokalnej z użyciem sondy w chirurgii przewodu pokarmowego i endokrynologicznej: badanie pilotażowe (Pilot pCLE)

Śródoperacyjne badanie histologiczne jest podstawowym narzędziem w chirurgii onkologicznej (zakres operacji, marginesy resekcji, węzeł wartowniczy) i niezbędne w innych okolicznościach, takich jak powtórne operacje lub operacje endokrynologiczne. Zastosowanie konwencjonalnej techniki skrawków mrożonych powoduje wydłużenie czasu pracy o około 40 minut.

Laserowa endomikroskopia konfokalna oparta na sondzie (pCLE) to nowa technika obrazowania, która umożliwia obrazowanie w czasie rzeczywistym z rozdzielczością mikroskopową. Konkretnie, po dożylnym wstrzyknięciu fluorescencyjnego środka kontrastowego – w tym badaniu zostanie użyta fluoresceina, system pCLE dostarcza sekwencje wideo tkanki, z wykorzystaniem mikroskopu konfokalnego zintegrowanego z minisondą oraz lasera małej mocy jako źródła oświetlenia (Cellvizio®, Mauna Kea Technologies, Paryż, Francja).

pCLE jest obecnie stosowany w endoskopii, głównie do obserwacji przełyku Barretta, polipów jelita grubego i zwężeń dróg żółciowych i trzustkowych, ale także w urologii. pCLE nigdy nie był testowany w warunkach chirurgii otwartej lub wspomaganej wideo. We Francji istnieją sondy nadające się do sterylizacji, które są certyfikowane do użytku z endoskopem (UHD CystoFlexTM, AQ-FLEX 19TM Mauna Kea Technologies, Paryż, Francja). Sonda (CelioFlex UHDTM) jest obecnie opracowywana do użytku w chirurgii laparoskopowej.

To badanie pilotażowe ma na celu ocenę pCLE w warunkach chirurgicznych. Każda struktura anatomiczna odpowiada specyficznej architekturze tkanki, która jest obecnie znana dzięki standardowemu badaniu histologicznemu. Konwencjonalna histologia oznacza zmianę architektury tkanki, z ablacją dopływu krwi, pobieraniem próbek i obróbką techniczną próbek (utrwalanie, cięcie, barwienie). pCLE pozwala ominąć ten proces i umożliwia uzyskanie obrazów struktury mikroskopowej in vivo, bez uszkodzenia komórek i bez przerwania krążenia krwi i limfy. Uzyskane sekwencje wideo odzwierciedlają mikroskopijną architekturę, w formie, która do tej pory nie została zmapowana ani wykorzystana dla narządów głębokich. Potencjał tej techniki wykazano w narządach jamy brzusznej tylko w modelu zwierzęcym, z bardzo zachęcającymi wynikami, ponieważ czułość i swoistość pCLE przewyższały standardowe badanie histologiczne.

Głównym celem jest przedstawienie histologicznego renderowania normalnych i patologicznych tkanek za pomocą pCLE. Oceniona zostanie również wykonalność diagnozy w czasie rzeczywistym. Zbadane zostaną wszystkie stany chirurgiczne, które zazwyczaj wymagają zamrożonego skrawka. W sumie zostanie włączonych 30 pacjentów z różnymi patologiami tarczycy/przytarczyc, żołądka, przełyku, trzustki, nadnerczy, okrężnicy/jelita cienkiego, wątroby.

Instalacja i otwarcie chirurgiczne zostaną przeprowadzone zgodnie ze standardowymi protokołami. Środek kontrastowy, fluoresceina, zostanie wstrzyknięty dożylnie, aby umożliwić wizualizację tkanki za pomocą pCLE. Podczas zabiegu chirurg wykona badanie pCLE, aby uzyskać i zarejestrować sekwencje wideo struktur in situ. Zamrożone skrawki zostaną uzyskane z tych samych próbek i będą stanowić dalsze wskazówki w podejmowaniu decyzji chirurgicznych.

Kryteria diagnostyczne zostaną określone przez zespół chirurgów i patologów, a następnie zweryfikowane przez retrospektywną analizę sekwencji w porównaniu z konwencjonalnymi preparatami histologicznymi. Dane zostaną wykorzystane do stworzenia banku obrazów referencyjnych obrazów z biopsji optycznej.

Badanie pozwoli wskazać warunki operacyjne, w których pCLE jest najskuteczniejsze i najbardziej wiarygodne i docelowo może zastąpić technikę skrawków mrożonych.

Drugie badanie, w porównawczych warunkach prospektywnych, mogłoby dalej koncentrować się tylko na obiecujących warunkach, aby ocenić dokładność diagnozy na podstawie statystycznej.