Nowatorska technika rozcieńczania izotopów do oceny stanu witaminy A

Tło:

Nie ma wiarygodnej metody oceny poziomu witaminy A (VA) u niemowląt i małych dzieci. Stężenie VA w surowicy nie jest wiarygodnym wskaźnikiem statusu VA, podczas gdy istniejące metody rozcieńczania izotopów deuter-VA w celu określenia statusu VA całego organizmu wymagają 3 tygodni i nie mają zastosowania u niemowląt i dzieci. Grupa badawcza badacza niedawno opracowała nowe uproszczone równanie do pomiaru wielkości puli VA w ciągu 4-5 dni, skorelowane z wartością przewidywaną przez model kompartmentowy i szacowania wielkości puli VA u dorosłych z dużą precyzją. W tym badaniu dokonaliśmy walidacji metody u zdrowych niemowląt i niemowląt ze stanem zapalnym.

Hipoteza:

Stan VA całego ciała u niemowląt i dzieci można oszacować bez uwzględniania ułamkowej szybkości katabolizmu w kontekście stanu zapalnego

Konkretne cele:

W tym badaniu badacze proponują określenie równania wczesnego punktu czasowego do oceny wielkości puli VA u niemowląt ze stanem zapalnym lub bez za pomocą opartej na modelu analizy kompartmentowej z frakcji 13C10-VA i 13C4-VA pochodzącej z dawki doustnej w osoczu przez czas.

Metody:

Łącznie 183 niemowląt (w wieku 9-18 miesięcy) weźmie udział w tym badaniu w dwóch kolejnych fazach „badania Super Kid”, które zapewnią pobranie nie więcej niż 2 próbek krwi żylnej od każdego niemowlęcia, mimo że w wielu punktach czasowych (w co najmniej 4 przedmioty / punkt czasowy) w ciągu 28-dniowego okresu badania będą dostępne do modelowania matematycznego. W tym badaniu badacze użyją dwóch różnych stabilnych izotopów witaminy A, np. octanu 13C10-retinylu i octanu 13C4-retinylu. 400 μg tych izotopów, rozpuszczonych w 0,5 ml oleju słonecznikowego, zostanie podane bezpośrednio do ust niemowlęcia za pomocą bezpośredniej pipety zastępczej. Matki zostaną poproszone o karmienie piersią dziecka po podaniu dawki doustnej w celu zwiększenia wchłaniania znakowanej witaminy A. Specyficzna aktywność octanu 13C10- i 13C4-retinylu w próbkach krwi będzie mierzona za pomocą chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią mas (LC/MS/MS ). Posłużą do tego kwestionariusze dotyczące diety i zachorowalności. Badacze wykorzystają również szczepionki PENTA jako środek do wywołania kontrolowanego stanu zapalnego (blisko naśladującego naturalną infekcję). PENTA jest kombinacją pięciu różnych antygenów szczepionkowych (wirusowe zapalenie wątroby typu B (HBV)/Haemophilus influenza typu b (Hib)/tężec-błonica-pełnokomórkowy krztusiec (TDwP)). Szczepienie to jest korzystne dla niemowląt, ponieważ Światowa Organizacja Zdrowia zaleca dawkę przypominającą szczepionki. Pod koniec badania szczepionki PENTA zostaną również podane badanym niemowlętom z grupy „nieszczepionej”.

(A) 115 niemowląt zostanie losowo zapisanych do 16 grup, z których 40 niemowląt będzie w pierwszej grupie, podczas gdy inne niemowlęta zostaną przydzielone do pozostałych 15 grup (n=5/grupa). W dniu 0 (o godzinie 0) wszystkie niemowlęta (n=115) otrzymają doustną dawkę octanu 13C10-retinylu. Próbki krwi (5 ml) będą pobierane od 6 do 16 dnia dawkowania w 9 różnych punktach czasowych. W dniu 16 (o godzinie 0) losowo wybrane 50% niemowląt (n=20) z pierwszej grupy oraz 30 niemowląt z pozostałych 6 grup otrzyma szczepionki PENTA, podczas gdy pozostałe 50% niemowląt (n=20) w pierwszej grupie, jak również 45 niemowląt w pozostałych 9 grupach, nie otrzyma żadnych szczepionek. 24 godziny po szczepieniu (w dniu 17) od niemowląt w grupie szczepionej zostanie pobrana próbka krwi z palca w celu zmierzenia CRP (QuikRead go, Orion, Finlandia). Niemowlęta, u których po szczepieniu PENTA nie rozwinie się stan zapalny (CRP > 5 mg/l) zostaną wykluczone z badania. W dniu 17 (o godzinie 0) wszystkie niemowlęta (n=115) otrzymają kolejną dawkę doustną octanu 13C4-retinylu. Próbki krwi (5 ml) będą pobierane od dnia 16 do dnia 28 w 11 różnych punktach czasowych dla każdego ze szczepionych i nieszczepionych niemowląt. W badaniu tym zostanie również oceniona absorpcja retinolu izotopowego poprzez określenie całkowitego wydalanego stolca do 72 godzin po podaniu dawki izotopu w podgrupie niemowląt

(B) 68 niemowląt zostanie zapisanych do tej fazy. Spośród nich 28 niemowląt zostanie losowo przydzielonych do 7 grup (n=4/grupę). Otrzymają szczepionki PENTA w dniu -1, a następnego dnia (dzień 0) otrzymają doustną dawkę octanu 13C4-retinylu. Próbki krwi (5 ml) będą pobierane od dnia 1 do dnia 28 w 8 różnych punktach czasowych. W oddzielnym projekcie 40 niemowląt otrzyma doustną dawkę octanu 13C10-retinylu w dniu 0, a próbki krwi (5 ml) zostaną pobrane w dniu 4. W dniu 7 wszystkie otrzymają kolejną doustną dawkę octanu 13C4-retinylu (400 μg, rozpuszczone w 0,5 ml oleju słonecznikowego). W dniu 10 niemowlęta otrzymają szczepionki PENTA (n=30) lub nie będą szczepione (n=10), a 1 dzień po szczepieniu zostaną pobrane próbki krwi (5 ml) od niemowląt, u których rozwinie się stan zapalny (CRP > 5 mg/l). w grupie szczepionej, a także od niemowląt w grupie kontrolnej (dzień 11).

Mierniki rezultatu:

Równanie wczesnego punktu czasowego do oceny wielkości puli VA w grupie niemowląt z zapaleniem lub bez