Wykorzystanie edycji epigenomu w zespole Kabuki: nowa droga w kierunku terapii genowej rzadkich zaburzeń genetycznych (Epi-KAB)

Cele główne i drugorzędne:

Głównym celem jest zbadanie patologicznej roli mutacji ML w KS, aby ułatwić identyfikację i charakterystykę strategii terapeutycznych w celu poprawy objawów u pacjentów z KS. Ze względu na brak leczenia w KS celem jest opracowanie modelu tej choroby z fibroblastów pochodzących od pacjentów i przeprogramowanie ich na mezenchymalne komórki macierzyste. To podejście wygeneruje biobank komórek macierzystych specyficznych dla KS, umożliwiając identyfikację typowych zaburzeń spowodowanych utratą funkcji (LoF) KMT2D. Opisany zostanie wpływ KMT2D LoF na transkrypcję, ale także mechanizmy epigenetyczne aktywowane podczas różnicowania MSC. Na koniec oceniony zostanie potencjał terapeutyczny metody „edycji” epigenomu w celu zwiększenia ekspresji dzikiego allelu KMT2D w celu przywrócenia funkcjonalnej aktywności MLL4 w leczonych MSC.

Celem drugorzędnym jest ocena możliwości powrotu do normy po leczeniu terapią genową CRISPR/Case9 na komórkach pacjentów

Metodologia (badanie projektowe, populacja, opis grup (jeśli dotyczy), kryteria włączenia, niewłączenia, główne i drugorzędne kryteria oceny, liczba podmiotów do włączenia, analiza statystyczna...):

Wychodząc od komórek pierwotnych wyizolowanych od pacjentów dotkniętych chorobą, zostanie opracowany model choroby in vitro. Przyjęte zostanie integracyjne, ale alternatywne podejście strategiczne do pozyskiwania mezenchymalnych komórek macierzystych pochodzących od pacjentów w celu zdefiniowania normalnych i nieprawidłowych obwodów transkrypcyjnych i epigenetycznych podczas KMT2D LoF. Łącząc autonomiczny potencjał odnowy MSC z technologią CRISPR/Cas9, opracowane zostanie podejście do „edycji” epigenomu do celów terapeutycznych w celu przywrócenia aktywności MLL4.

Projekt ten będzie stanowił krok naprzód w zrozumieniu mechanizmów molekularnych odpowiedzialnych za KS. Model in vitro zapewni społeczności naukowej eksperymentalny system do badania KS. Wreszcie, celem jest określenie molekularnych podstaw KS i opracowanie strategii terapeutycznej w celu poprawy niektórych objawów u pacjentów z KS.

Proces (liczba wizyt, czas włączenia, czas obserwacji):

Zostanie włączonych 8 osób: 4 pacjentów z zespołem Kabuki potwierdzonym badaniem genetyki molekularnej genu KMT2D.

4 rodziców tej samej płci co pacjent

Wykonalność:

Na oddziale genetyki klinicznej Szpitala Uniwersyteckiego w Montpellier obserwuje się ponad 40 pacjentów z zespołem Kabuki.

Skutki / perspektywy:

Identyfikacja konsekwencji mutacji w genie KMT2D na zmiany znaczników epigenetycznych i zmian strukturalnych komórek, a także próba korekty genów metodą CRISPR/Cas9 pozwoli lepiej zrozumieć chorobę (oraz geny rozregulowane przez post-KMT2D zmiany epigenetyczne), a także otworzy obiecującą ścieżkę terapii genowej metodą CRISPR/Cas9.