Роль кишечных простейших и гельминтов в течении язвенного колита

Проспективное когортное и рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование будет проведено на базе НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней и отделения колопроктологии Республиканской клинической больницы №1 МЗ РУз.

Участники Диагноз язвенного колита будет подтвержден с использованием стандартных клинических, эндоскопических, рентгенографических и патологических критериев в соответствии с Монреальской классификацией степени и тяжести язвенного колита (Silverberg MS et al. 2006). Категории язвенного колита включают проктит, левосторонний колит и обширный колит или панколит. Активность заболевания будет измеряться по шкале Mayo Clinic, состоящей из 4 пунктов: частота стула, ректальное кровотечение, результаты гибкой проктосигмоидоскопии и функциональная оценка пациента (D'Haens G et al. 2007). Продолжительность заболевания будет измеряться в годах с момента появления первых симптомов.

Пациентов с ЯК, госпитализированных в отделение колопроктологии Республиканской клинической больницы №1, будут обследовать перед операцией и приемом медикаментов. Дополнительные группы: в 1-ю войдут больные ЯК, инфицированные B. hominis, которые будут обследованы до и после приема нитазоксанида (монотерапия), во 2-ю группу войдут больные ЯК, инфицированные B. hominis, до и после приема нитазоксанида и месалазина (комбинация терапия) и 3-я - больные ЯК, инфицированные B. hominis, до и после приема месалазина (монотерапия).

В контрольную группу войдут жители Ташкентской области без жалоб со стороны желудочно-кишечного тракта, которые будут обращаться в поликлинику для плановых медицинских осмотров. Рекомендуемый возраст населения от 17 до 90 лет

Критерии исключения Пациенты с диагнозом болезни Крона будут исключены из анализа. Другими критериями исключения являются токсический мегаколон, абсцесс брюшной полости, симптоматическая стриктура толстой кишки, стома, колэктомия в анамнезе, повышенный риск инфекционных осложнений (например, в результате недавно перенесенной гнойной инфекции, кишечных возбудителей, обнаруженных при микробиологическом анализе кала, активного или латентного туберкулеза, иммунодефицит, гепатит B или C или недавняя живая вакцинация), клинически значимые отклонения лабораторных показателей, беременность или лактация, нестабильные или неконтролируемые медицинские расстройства, предполагаемая потребность в серьезном хирургическом вмешательстве, дисплазия толстой кишки или аденомы, а также злокачественные новообразования.

Для дополнительных групп, кроме указанных выше, будут исключены следующие пациенты: оперированные лица, когда-либо принимавшие иммунодепрессанты или биологические препараты, инфицированные кишечными патогенными бактериями, в том числе Clostridium difficile, Salmonella spp, Shigella spp, Campylobacter spp, Yersinia spp и Mycobacteria. .

Паразитологический метод Сбор образцов стула. Три образца стула для паразитологического исследования будут взяты как у контрольных субъектов, так и у пациентов с ЯК с интервалом в 2 дня до терапии (все участники) и на 2-й неделе монотерапии нитазоксанидом, нитазоксанидом в сочетании с месалазином и монотерапией месалазином, а также на 6-й и 12 недель от начала терапии. Образцы кала (1-2г.) будут собирать в индивидуальные емкости, с 5 мл консерванта Турдиева при условии консервации и окрашивания цист простейших и яиц глистов в течение года. В состав консерванта Турдиева входят: 80 мл 0,2% водного раствора нитрита натрия, 10 мл формальдегида, 2 мл глицерина, 8 мл раствора Люголя, 250 мл дистиллированной воды.

Образцы кала (1-2г.) для выявления C. parvum (Cryptosporidium parvum) собирают в индивидуальную пустую тару не менее чем за 1 час до паразитологического исследования.

микроскопия. Паразитологическая диагностика будет проводиться с помощью тройной копроскопии с использованием метода концентрации формалина и этилацетата [Truant AL, Elliott SH] и окрашивания мазков йодом [King M.]. Для окрашивания препаратов будет использоваться раствор Люголя. Интенсивность простейших будет оцениваться по количеству простейших в поле зрения (окуляр х10, объектив х40) в окрашенных йодом мазках, взятых до применения формалин-этилацетатного концентрирования, количество простейших будет рассчитываться не менее чем в 10 поля зрения. 1-2, 3-4 и 5-6 микроорганизмов в поле зрения считали инфекцией низкой, средней и высокой интенсивности соответственно. Для обнаружения C. parvum для окрашивания препаратов будет использоваться модифицированный метод Циля-Нильсена [Henricksen SA, Pohlenz JF]. Окрашенные мазки будут сканироваться с помощью масляной иммерсионной линзы ×100 на наличие C. parvum.

Микробиологические методы Микробиологические методы будут проводиться для выявления патогенных бактерий, в том числе Clostridium difficile, Salmonella spp, Shigella spp, Campylobacter spp, Yersinia spp и Mycobacteria, только у больных ЯК, инфицированных B. hominis до начала терапии. В случае обнаружения кишечных патогенных бактерий участники будут исключены из дальнейшего исследования.

Сбор образцов стула. Образцы кала будут собираться у пациентов с ЯК, инфицированных B. hominis, перед началом терапии в стерильные контейнеры с широким горлышком и завинчивающимися крышками и немедленно доставляться в лабораторию, предпочтительно в течение 2 часов. Образцы будут обработаны для микроскопии, анаэробных и аэробных культур и ИФА (только для Clostridium difficile).

Процедуры Будет проведено паразитологическое обследование больных ЯК и населения. Дополнительные пациенты с ЯК, инфицированные B. hominis, будут разделены на 3 когорты двойным слепым методом для получения одного из следующих видов лечения: (1) пациентов с ЯК, инфицированных B. hominis, будут лечить нитазоксанидом, 1,0 г/день. (две таблетки) дважды перорально в течение 14 дней подряд; (2) Пациентов с ЯК, инфицированных B. hominis, будут лечить нитазоксанидом по 1,0 г/сутки (одна таблетка — 500 мг) два раза в сутки перорально и месалазином 1,5 г/сутки (одна таблетка — 500 мг) трижды в сутки перорально для 14 дней подряд; (3) пациентов с ЯК, инфицированных B. hominis, будут лечить месалазином ≥3 г/сут (одна таблетка — 500 мг) три раза в день перорально в течение 14 дней подряд. Кроме лекарственных препаратов больные всех трех групп придерживались диеты. Цель последующего наблюдения заключалась в мониторинге соблюдения режима лечения и регистрации реакции на терапию, нежелательных явлений и рецидивов симптомов.

Остальные выявленные патогенные простейшие и гельминты обрабатывались стандартными дозировками противопаразитарных препаратов.

Последующее наблюдение Исследование проводилось в два этапа. На первом этапе будет проведено паразитологическое обследование больных ЯК до лечения и популяционное. На втором этапе исследования у больных ЯК, инфицированных B. hominis, будут применяться препараты с антибластоцистной активностью, а также мониторинг эффективности терапии. Паразитологическое, микробиологическое, клиническое и эндоскопическое исследования будут проводиться до начала терапии и на 2-й, 6-й и 12-й неделях. При каждом посещении будет подсчитываться балльная оценка клиники Майо и определяться интенсивность/ликвидация B. hominis.

Критерии исхода Критериями исхода терапии являются: эрадикация/снижение интенсивности инфекции B. hominis, а клинический ответ пациентов с ЯК на 2-й, 6-й и 12-й неделях будет определяться как снижение баллов по шкале Mayo Clinic.