Rola pierwotniaków i robaków jelitowych w przebiegu wrzodziejącego zapalenia jelita grubego

Prospektywne kohortowe i randomizowane, podwójnie ślepe, kontrolowane placebo badanie zostanie przeprowadzone na podstawie Instytutu Badawczego Epidemiologii, Mikrobiologii i Chorób Zakaźnych oraz Oddziału Koloproktologii Republiki Szpitala Klinicznego nr 1 Ministerstwa Zdrowia Publicznego Republiki Uzbekistanu.

Uczestnicy Diagnoza WZJG zostanie potwierdzona przy użyciu standardowych kryteriów klinicznych, endoskopowych, radiograficznych i patologicznych, zgodnie z klasyfikacją montrealską zakresu i ciężkości wrzodziejącego zapalenia jelita grubego (Silverberg MS i wsp. 2006). Kategorie UC obejmują zapalenie odbytnicy, lewostronne zapalenie jelita grubego oraz rozległe zapalenie jelita grubego lub pancolitis. Aktywność choroby będzie mierzona za pomocą skali Mayo Clinic, która składa się z 4 pozycji: częstość stolca, krwawienie z odbytu, wyniki elastycznej proktosigmoidoskopii i ocena czynnościowa pacjenta (D'Haens G i wsp. 2007). Czas trwania choroby będzie mierzony w latach od pierwszego wystąpienia objawów.

Pacjenci z WZJG hospitalizowani na oddziale koloproktologii Republiki Szpitala Klinicznego nr 1 będą badani przed operacją i przyjmowaniem leków. Dodatkowe grupy kohortowe: pierwsza grupa obejmie chorych na WZJG zakażonych B. hominis, którzy będą badani przed i po podaniu nitazoksanidu (monoterapia), druga grupa obejmie chorych na WZJG zakażonych B. hominis przed i po podaniu nitazoksanidu i mesalazyny (połączenie terapia) i trzecia - pacjenci z WZJG zakażony B. hominis przed i po przyjęciu mesalazyny (monoterapia).

Grupą kontrolną będą mieszkańcy regionu Taszkentu bez dolegliwości ze strony przewodu pokarmowego, którzy zgłoszą się do kliniki na planowe badania lekarskie. Sugerowany wiek ludności od 17 do 90 lat

Kryteria wykluczenia Pacjenci z rozpoznaniem choroby Leśniowskiego-Crohna zostaną wykluczeni z analizy. Inne kryteria wykluczenia to toksyczne rozdęcie okrężnicy, ropień brzuszny, objawowe zwężenie jelita grubego, stomia, przebyta kolektomia, zwiększone ryzyko powikłań infekcyjnych (np. niedobór odporności, wirusowe zapalenie wątroby typu B lub C lub niedawne żywe szczepienie), klinicznie znaczące nieprawidłowości laboratoryjne, ciąża lub laktacja, niestabilne lub niekontrolowane zaburzenia medyczne, przewidywana konieczność poważnego zabiegu chirurgicznego, dysplazja okrężnicy lub gruczolaki oraz nowotwory złośliwe.

Z dodatkowych grup poza wyżej wymienionymi wykluczeni zostaną pacjenci: operowani, kiedykolwiek stosujący leki immunosupresyjne lub biologiczne, zakażeni bakteriami chorobotwórczymi jelit, w tym Clostridium difficile, Salmonella spp, Shigella spp, Campylobacter spp, Yersinia spp, Mycobacteria .

Metoda parazytologiczna Pobieranie próbek kału. Zarówno od osób kontrolnych, jak i chorych na WZJG zostaną pobrane trzy próbki kału do badania parazytologicznego w odstępie 2 dni przed terapią (wszyscy uczestnicy) oraz w 2. 12 tygodni od rozpoczęcia terapii. Próbki kału (1-2 g.) będą zbierane do pojedynczych pojemników, z 5 ml środka konserwującego Turdiewa pod warunkiem konserwacji i barwienia cyst pierwotniaków i jaj robaków przez rok. Konserwant Turdiewa zawiera: 80 ml 0,2% wodnego roztworu azotynu sodu, 10 ml formaldehydu, 2 ml gliceryny, 8 ml płynu Lugola, 250 ml wody destylowanej.

Próbki kału (1-2 g.) w celu wykrycia C. parvum (Cryptosporidium parvum) zostaną pobrane do pojedynczych pustych pojemników nie mniej niż 1 godzinę przed badaniem parazytologicznym.

Mikroskopia. Diagnostyka parazytologiczna zostanie przeprowadzona metodą potrójnej koproskopii z wykorzystaniem techniki formalina – stężenie octanu etylu [Truant AL, Elliott SH] oraz rozmazów barwionych jodem [King M.]. Do preparatów barwiących stosowany będzie płyn Lugola. Intensywność pierwotniaków zostanie oszacowana na podstawie liczby pierwotniaków w polu widzenia (oczne x10, obiektywne x40) w rozmazach barwionych jodem pobranych przed zastosowaniem techniki zagęszczania formalina - octan etylu, liczba pierwotniaków zostanie obliczona co najmniej w 10 pola widzenia. 1-2, 3-4 i 5-6 mikroorganizmów w polu widzenia uznano za infekcję odpowiednio o małej, średniej i dużej intensywności. Do wykrywania C. parvum do wybarwiania preparatów wykorzystana zostanie zmodyfikowana metoda Ziehla - Neelsena [Henricksen SA, Pohlenz JF]. Zabarwione rozmazy zostaną zeskanowane soczewką immersyjną ×100 na obecność C. parvum.

Metody mikrobiologiczne Metody mikrobiologiczne będą prowadzone w celu wykrycia bakterii chorobotwórczych, w tym Clostridium difficile, Salmonella spp, Shigella spp, Campylobacter spp, Yersinia spp, Mycobacteria tylko od pacjentów z WZJG zakażonych B. hominis przed terapią. W przypadku wykrycia bakterii chorobotwórczych w jelitach uczestnicy zostaną wykluczeni z dalszych badań.

Pobieranie próbek kału. Próbki kału będą pobierane od pacjentów z WZJG zakażonych B. hominis przed terapią do sterylnych, zakręcanych pojemników z szeroką szyjką i natychmiast przekazywane do laboratorium, najlepiej w ciągu 2 godzin. Próbki zostaną przygotowane do mikroskopii, hodowli beztlenowej i tlenowej oraz testu ELISA (tylko dla Clostridium difficile).

Procedury Przeprowadzone zostaną badania parazytologiczne pacjentów z WZJG i całej populacji. Dodatkowi pacjenci z UC zakażony B. hominis zostaną podzieleni na 3 kohorty, metodą podwójnie ślepej próby, aby otrzymać 1 z następujących terapii: (1) pacjenci z UC zakażony B. hominis będą leczeni nitazoksanidem, 1,0 g/dzień (dwie tabletki) dwa razy doustnie przez 14 kolejnych dni; (2) Pacjenci z WZJG zakażeni B. hominis będą leczeni nitazoksanidem w dawce 1,0 g/dobę (jedna tabletka – 500 mg) dwa razy dziennie doustnie i mesalazyną w dawce 1,5 g/dobę (jedna tabletka – 500 mg) trzy razy dziennie doustnie przez 14 kolejnych dni; (3) pacjenci z B. hominis zakażonymi WZJG będą leczeni mesalazyną ≥3 g/dobę (jedna tabletka - 500 mg) trzy razy dziennie doustnie przez 14 kolejnych dni. Z wyjątkiem leków pacjenci ze wszystkich trzech grup przestrzegali diety. Celem obserwacji było monitorowanie przestrzegania zaleceń lekarskich oraz rejestracja odpowiedzi na leczenie, zdarzeń niepożądanych i nawrotów objawów.

Inne wykryte chorobotwórcze pierwotniaki i robaki leczono standardowymi dawkami leków przeciwpasożytniczych.

Kontynuacja Badanie przeprowadzono w dwóch etapach. W pierwszym etapie przeprowadzone zostanie badanie parazytologiczne pacjentów z WZJG przed leczeniem i populacją. W drugim etapie badań u pacjentów z WZJG zakażonych B. hominis zostaną zastosowane leki o działaniu przeciw Blastocystis oraz monitorowanie skuteczności terapii. Badania parazytologiczne, mikrobiologiczne, kliniczne i endoskopowe będą wykonywane przed terapią oraz w 2, 6 i 12 tygodniu. Podczas każdej wizyty zostanie obliczona ocena Mayo Clinic i zostanie określona intensywność/eliminacja B. hominis.

Miary wyników Miernikami wyników terapii są: eradykacja/zmniejszenie intensywności zakażenia B. hominis, a odpowiedź kliniczna pacjentów z UC w 2., 6. i 12. tygodniu zostanie zdefiniowana jako zmniejszenie wyniku Mayo Clinic.