Nicht-invasive pränatale Diagnose (NIPD) von Mukoviszidose

Die jüngste Entwicklung von Techniken zur Analyse der im mütterlichen Blut zirkulierenden fetalen DNA eröffnete neue Perspektiven für die pränatale Diagnose (PD). Nicht-invasive PND (NIPD) ist heute die Methode der Wahl zur Bestimmung des fetalen Geschlechts (genetische Störungen im Zusammenhang mit dem X-Chromosom) und des Rhesus-Genotyps. NIPD findet zunehmend Anwendung bei der Diagnose monogener Erkrankungen aufgrund von Mutationen der väterlichen Übertragung. Eine Reihe technischer Herausforderungen erschweren jedoch immer noch diagnostische Anwendungen in der Routine und müssen unter Berücksichtigung der Aspekte Kosten, Zuverlässigkeit (falsch negativ …) und Komplexität der Ausrüstung und Bioinformatikstudien gelöst werden.

Die Forscher schlagen vor, einen analytischen und klinischen NIPD-Test für Mukoviszidose aus mütterlichem Blut zu entwickeln und zu validieren Analyse zirkulierender freier fetaler DNA (cff-DNA), Suche nach der väterlichen Mutation in Familien mit Heterozygotie der CFTR-Verbindung.

Die auf MEMO basierende Testmethode in Verbindung mit einer Plattform für Echtzeit-PCR kann zum Nachweis von Spuren von DNA-Mutanten verwendet werden. Diese Technik wird häufig bei Mutationen im Mosaik (weniger als 1 %) häufiger Krebsgene eingesetzt. Der positive Nachweis der väterlichen Mutation wird immer durch eine zweite Minisequenzierungstechnik überprüft.

Vor jedem spezifischen CFTR-Test wird das DNA-Profil jeder Probe mithilfe eines kommerziellen Kits von Mini STR bestimmt, das für die Untersuchung von Fallstudien geeignet ist. Ein tri-allelisches Profil für Marker beweist das Vorhandensein fetaler DNA in der untersuchten Probe und begrenzt so falsch negative Ergebnisse, die mit dem Fehlen oder unzureichenden Mengen an cff-DNA verbunden sind.

Der Validierungsschritt der Analysemethoden der Forscher wird an künstlich hergestellten chimären DNA-Kontrollproben durchgeführt. Anschließend wird der Test durch eine retrospektive Studie des mütterlichen Serums von schwangeren Frauen klinisch validiert, die während des Studienzeitraums (2012 bis 2013) Gegenstand einer PND oder PGD (Präimplantationsdiagnostik) einer CF-Anfrage im Labor waren.

Die Forscherstruktur ist ein Referenzzentrum für PGD, PND und NBS (Neugeborenen-Screening) von Mukoviszidose. Die Proben werden gemäß den geltenden Vorschriften gesammelt. Die voranalytische Probenbehandlung erfolgt in Echtzeit und das Plasma wird für den zweiten Schritt der Studie gespeichert.

Die Validierung der vorgeschlagenen Tests ermöglicht Folgendes:

• Eine externe Qualitätskontrolle (QC) durchführen zu lassen, die das Vorhandensein einer Neben-DNA in der untersuchten Probe bestätigt. Diese QC könnte für alle NIPD-Tests verwendet werden, die auf der Suche nach einer Genomsequenz basieren, die im mütterlichen Genom fehlt
• Eine hochempfindliche Methode zum Nachweis mutierter DNA-Spuren zu haben, die durch den Nachweis gleichartiger Mutationen für neue NIPD-Tests bei anderen monogenen Krankheiten entwickelt werden kann.

Das Projekt der Forscher, das sich auf die Suche nach dem väterlichen Allel in der Familie mit Heterozygotie der CFTR-Verbindung beschränkt, ist ein erster Schritt in der Umsetzung eines pränatalen Diagnoseansatzes für Mukoviszidose, den die Forscher entwickeln wollen, um invasive Eingriffe zu reduzieren.