Kystisen fibroosin ei-ivasiivinen prenataalinen diagnoosi (NIPD).

Äidin veressä kiertävän sikiön DNA:n analysointitekniikoiden viimeaikainen kehitys avasi uusia näkökulmia synnytystä edeltävälle diagnoosille (PD). Non-invasiivinen PND (NIPD) on nyt suosituin menetelmä sikiön sukupuolen (X-kromosomiin liittyvät geneettiset häiriöt) ja reesusgenotyypin määrittämiseen. NIPD alkaa löytää sovelluksia monogeenisten sairauksien diagnosoinnissa isän leviämisen mutaatioille. Useat tekniset haasteet haittaavat kuitenkin edelleen rutiininomaisia ​​diagnostisia sovelluksia, ja ne on ratkaistava ottaen huomioon kustannus-, luotettavuus (väärä negatiivinen...) ja laitteiden ja bioinformatiikan tutkimusten monimutkaisuus.

Tutkijat ehdottavat, että kehitetään ja validoidaan analyyttinen ja kliininen NIPD-testi kystiselle fibroosille äidin verestä analysoimalla kiertävää vapaata sikiön DNA:ta (cff-DNA) ja etsimällä isän mutaatiota perheissä, joissa on CFTR-yhdisteen heterotsygoottisuus.

MEMO-pohjaista testimenetelmää, joka liittyy reaaliaikaisen PCR:n alustaan, voidaan käyttää jäljitetyn DNA-mutantin havaitsemiseen. Tätä tekniikkaa käytetään yleisesti mutaatioissa yleisten syöpien geeneissä (alle 1 %). Isän mutaation positiivinen havaitseminen tarkistetaan aina toisella minisekvensointitekniikalla.

Ennen erityistä CFTR-testiä kunkin näytteen DNA-profiili määritetään käyttämällä kaupallista Mini STR -sarjaa, joka on mukautettu tapausten tutkimiseen. Markkerien kolmialleelinen profiili todistaa sikiön DNA:n läsnäolon tutkitussa näytteessä ja rajoittaa siten cff-DNA:n puutteeseen tai riittämättömiin määriin liittyviä vääriä negatiivisia.

Tutkijoiden analyyttisten menetelmien validointivaihe tehdään keinotekoisesti luoduille kimeerisille DNA-kontrollinäytteille. Sitten testi validoidaan kliinisesti retrospektiivisellä tutkimuksella äidin seerumista raskaana olevilta naisilta, joille on tehty CF-pyynnön PND tai PGD (preimplantaatiogeenidiagnoosi) laboratoriossa tutkimusjakson (2012–2013) aikana.

Tutkijarakenne on kystisen fibroosin PGD:n, PND:n ja NBS:n (vastasyntyneen seulonnan) vertailukeskus. Näytteet kerätään voimassa olevien määräysten mukaisesti. Esianalyyttinen näytekäsittely tehdään reaaliajassa ja plasma varastoidaan tutkimuksen toista vaihetta varten.

Ehdotettujen testien validointi mahdollistaa:

• Ulkoinen laadunvalvonta (QC) vahvistaa vähäisen DNA:n esiintymisen tutkitussa näytteessä. Tätä QC:tä voidaan käyttää kaikissa NIPD-testeissä, jotka perustuvat äidin genomista puuttuvan genomisen sekvenssin etsimiseen
• Erittäin herkkä menetelmä mutantti-DNA:n havaitsemiseksi, jota voidaan kehittää uusiin NIPD-testeihin muissa monogeenisissä sairauksissa havaitsemalla samanluonteisia mutaatioita.

Tutkijoiden projekti, joka rajoittuu isän alleelin etsimiseen perheestä, jossa on CFTR-yhdisteen heterotsygoottisuus, on ensimmäinen askel kystisen fibroosin synnytystä edeltävän diagnoosin lähestymistavan toteuttamisessa, jota tutkijat pyrkivät kehittämään invasiivisten toimenpiteiden vähentämiseksi.