Diagnóstico Prenatal No Invasivo (NIPD) de Fibrosis Quística

El reciente desarrollo de técnicas para analizar el ADN fetal circulante en sangre materna abrió nuevas perspectivas para el diagnóstico prenatal (DP). El PND no invasivo (NIPD) es ahora el método de elección para la determinación del sexo fetal (trastornos genéticos vinculados al cromosoma X) y el genotipo rhesus. NIPD comienza a encontrar aplicaciones en el diagnóstico de enfermedades monogénicas por mutaciones de transmisión paterna. Sin embargo, una serie de desafíos técnicos aún obstaculizan las aplicaciones de diagnóstico en la rutina y deben resolverse teniendo en cuenta los aspectos de costo, confiabilidad (falsos negativos...) y complejidad de los estudios de equipo y bioinformática.

Los investigadores proponen desarrollar y validar una prueba NIPD analítica y clínica para la fibrosis quística a partir de sangre materna mediante el análisis del ADN fetal libre circulante (cff-DNA), buscando la mutación paterna en familias con heterocigosidad del compuesto CFTR.

El método de prueba basado en MEMO asociado con una plataforma para PCR en tiempo real se puede utilizar para la detección de trazas de ADN mutante. Esta técnica se usa comúnmente para mutaciones en mosaico (menos del 1%) de genes de cánceres comunes. La detección positiva de la mutación paterna siempre se comprueba mediante una segunda técnica de minisecuenciación.

Previamente a cualquier prueba CFTR específica, se determinará el perfil de ADN de cada muestra utilizando un kit comercial de Mini STR adaptado al estudio de casos. Un perfil trialélico de marcadores demostrará la presencia de ADN fetal en la muestra estudiada y, por lo tanto, limitará los falsos negativos asociados con la falta o cantidades insuficientes de cff-DNA.

El paso de validación de los métodos analíticos de los investigadores se realizará sobre muestras de control de ADN quimérico creadas artificialmente. Luego, la prueba será validada clínicamente mediante un estudio retrospectivo del suero materno de mujeres embarazadas, que han sido objeto de PND o PGD (diagnóstico genético preimplantacional) de solicitud de FQ en el laboratorio durante el período de estudio (2012 a 2013).

La estructura de investigadores es un centro de referencia para PGD, PND y NBS (cribado neonatal) de fibrosis quística. Las muestras se recogerán de acuerdo con la normativa vigente. El tratamiento preanalítico de las muestras se realizará en tiempo real y el plasma se almacenará para el segundo paso del estudio.

La validación de las pruebas propuestas permitirá:

• Disponer de un control de calidad (QC) externo que confirme la presencia de un ADN minoritario en la muestra estudiada. Este QC podría usarse para todas las pruebas NIPD basadas en la búsqueda de una secuencia genómica ausente del genoma materno
• Disponer de un método de alta sensibilidad para detectar trazas de ADN mutante que pueda desarrollarse para nuevas pruebas de NIPD en otras enfermedades monogénicas mediante la detección de mutaciones de la misma naturaleza.

El proyecto de los investigadores, limitado a la búsqueda del alelo paterno en la familia con heterocigosidad del compuesto CFTR, es un primer paso en la implementación de un enfoque de diagnóstico prenatal de fibrosis quística que los investigadores pretenden desarrollar para reducir los procedimientos invasivos.