Influencia del edoxabán en la coagulabilidad y la generación de trombina: un estudio in vitro centrado en la trombelastografía

protocolo experimental

1. El día del experimento se recogerán muestras de sangre en tubos de citrato al 3,2%.
2. Se centrifugará un tubo de sangre citratada para recolectar plasma para mediciones de biomarcadores (proteína C reactiva (CRP), fibrinógeno, factor de von Willebrand (vWF), interleucina (IL)-6, p-selectina, inhibidor del activador del plasminógeno (PAI)-1 , metaloproteinasa de matriz (MMP)-9).
3. Las muestras de sangre se incubarán con diferentes concentraciones de edoxabán (sin edoxabán, rango subterapéutico: 30 nM, rango terapéutico: 300 nM y rango supraterapéutico: 900 nM) (3).

A) El sistema analizador de hemostasia Cora® (Cora®) se utilizará para evaluar la evaluación cualitativa y cuantitativa de las propiedades hemostáticas de una muestra de sangre en presencia o ausencia de edoxabán. El CORA es un módulo informático integrado con capacidad de conexión Ethernet y proporciona mediciones continuas de viscoelasticidad de frecuencia de resonancia utilizando un cartucho microfluídico desechable de cuatro canales para determinar simultáneamente la fuerza máxima del coágulo de plaquetas y fibrina, la fuerza del coágulo de fibrina y la respuesta a agentes antiplaquetarios o anticoagulantes. El cartucho tiene cuatro canales: el canal de caolín citrado (CK) que mide la fuerza del coágulo de plaquetas y fibrina, el canal anti-Xa, el canal DTI y el canal FFC que mide la contribución del fibrinógeno funcional.

Además, utilizando el software V-curve, se evaluarán los siguientes parámetros de la cinética de generación de trombina a partir del canal CK: R - Período de tiempo de latencia desde el momento en que se colocó la sangre en el analizador TEG® hasta la formación inicial de fibrina . Esto representa la porción enzimática de la coagulación.

K - El tiempo K es una medida de la velocidad para alcanzar un cierto nivel de fuerza del coágulo. Esto representa la cinética del coágulo.

alfa: mide la rapidez de la acumulación de fibrina y la reticulación (fortalecimiento de coágulos). Esto representa el nivel de fibrinógeno.

MA: la amplitud máxima es una función directa de las propiedades dinámicas máximas de la unión de fibrina y plaquetas a través de GPIIb/IIIa y representa la fuerza máxima del coágulo de fibrina. Esto representa la función/agregación plaquetaria.

TMRTG: tiempo hasta la tasa máxima de generación de trombos. MRTG - Tasa máxima de generación de trombos. TG - Total de trombos generados. TMRL: tiempo hasta la tasa máxima de lisis MRL: tasa máxima de lisis L: lisis total D: Delta es la diferencia entre el tiempo R y el tiempo del punto de división inicial (SP, minutos) del trazado de TEG (R - SP), que representa el intervalo de tiempo de mayor crecimiento del coágulo secundario a la generación máxima de trombina.

B) Sistema Calibrado Automatizado Thrombogram® (CAT): El tiempo de retraso, la producción máxima de trombina, el índice de tasa de velocidad media y el potencial endógeno de trombina (ETP) se evaluarán mediante un trombograma calibrado automatizado en plasma pobre en plaquetas (Trombinoscopio de Stago).