Wpływ edoksabanu na krzepliwość krwi i wytwarzanie trombiny: badanie in vitro koncentrujące się na trombelastografii

eksperymentalny protokół

1. W dniu eksperymentu zostaną pobrane próbki krwi do probówek z 3,2% cytrynianem.
2. Jedna probówka z cytrynianem krwi zostanie odwirowana w celu pobrania osocza do pomiarów biomarkerów (białko C-reaktywne (CRP), fibrynogen, czynnik von Willebranda (vWF), interleukina (IL)-6, p-selektyna, inhibitor aktywatora plazminogenu (PAI)-1 , metaloproteinaza macierzy (MMP)-9).
3. Próbki krwi będą inkubowane z różnymi stężeniami edoksabanu (bez edoksabanu, zakres subterapeutyczny - 30 nM, zakres terapeutyczny -300 nM i zakres supraterapeutyczny - 900 nM) (3).

A) System analizatora hemostazy Cora® (Cora®) będzie używany do jakościowej i ilościowej oceny właściwości hemostatycznych próbki krwi w obecności lub przy braku edoksabanu. CORA jest zintegrowanym modułem komputerowym z możliwością połączenia Ethernet i zapewnia ciągłe pomiary lepkosprężystości o częstotliwości rezonansowej przy użyciu jednorazowego czterokanałowego wkładu mikroprzepływowego w celu jednoczesnego określenia maksymalnej siły skrzepu płytkowo-fibrynowego, siły skrzepu fibrynowego i odpowiedzi na środki przeciwpłytkowe lub przeciwzakrzepowe. Wkład ma cztery kanały – kanał z cytrynianowym kaolinem (CK), który mierzy siłę skrzepu fibrynowo-płytkowego, kanał anty-Xa, kanał DTI i kanał FFC, który mierzy udział funkcjonalnego fibrynogenu.

Dodatkowo za pomocą oprogramowania V-curve zostaną ocenione następujące parametry kinetyki wytwarzania trombiny z kanału CK: R - Okres czasu utajenia od momentu umieszczenia krwi w analizatorze TEG® do początkowego tworzenia się fibryny . To reprezentuje enzymatyczną część krzepnięcia.

K - Czas K jest miarą szybkości osiągania określonego poziomu siły skrzepu. To reprezentuje kinetykę skrzepu.

alfa - mierzy szybkość tworzenia się fibryny i sieciowania (wzmocnienia skrzepu). Oznacza to poziom fibrynogenu.

MA – maksymalna amplituda jest bezpośrednią funkcją maksymalnych właściwości dynamicznych wiązania fibryny i płytek krwi przez GPIIb/IIIa i reprezentuje ostateczną wytrzymałość skrzepu fibrynowego. Oznacza to funkcję/agregację płytek krwi.

TMRTG - Czas do maksymalnej szybkości tworzenia skrzepliny. MRTG - Maksymalna szybkość tworzenia skrzepliny. TG - Wytworzona całkowita skrzeplina. TMRL – Czas do maksymalnej szybkości lizy MRL – Maksymalna szybkość lizy L – Całkowita liza D – Delta to różnica między czasem R a czasem początkowego punktu podziału (SP, min) zapisu TEG (R – SP), reprezentująca przedział czasu największego wzrostu skrzepu wtórny do szczytowego wytwarzania trombiny.

B) Skalibrowany automatyczny system trombogramu® (CAT): Czas opóźnienia, szczytowe wytwarzanie trombiny, wskaźnik średniej prędkości i endogenny potencjał trombiny (ETP) zostaną ocenione za pomocą skalibrowanego automatycznego trombogramu w osoczu ubogopłytkowym (trombinoskop firmy Stago).