L'aderenza al tenofovir per guidare e valutare rapidamente la PrEP e la terapia per l'HIV (TARGET)

Obiettivi dello studio

Obiettivo primario:

• Determinare la farmacocinetica di tenofovir (TFV) nel sangue, nelle urine e nel plasma negli adulti con aderenza perfetta, mediana e bassa a tenofovir disoproxil fumarato (TDF).

Obiettivi secondari

• Determinare il tasso di washout di tenofovir nel sangue, nel plasma e nelle urine tra i partecipanti con vari livelli di aderenza al TDF.
• Per determinare le concentrazioni allo stato stazionario di TFV nel sangue e nel plasma tra i livelli controllati di aderenza TDF.
• Per confrontare l'accordo tra TFV nelle concentrazioni di sangue, plasma e urina.
• Determinare le concentrazioni minime intracellulari di tenofovir-difosfato (TFV-DP) in campioni di cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) e macchie di sangue essiccato (DBS) in adulti con aderenza perfetta, mediana e bassa al farmaco.
• Identificare possibili soglie di concentrazione per l'interpretazione clinica di un test binario di aderenza point-of-care per la misurazione di TFV (e/o TFV-DP) in relazione all'aderenza a TDF.

Progetto:

Il disegno dello studio è uno studio farmacocinetico randomizzato in aperto su volontari adulti sani. Lo studio prevede la raccolta di dati clinici e campioni biologici e i soggetti forniranno il consenso informato scritto alla partecipazione. Verranno arruolati volontari adulti sani (sierologia HIV e Ag di superficie dell'epatite B negativi). Una volta ottenuto il consenso scritto, verrà eseguita la visita di screening. Il team di studio otterrà il numero di telefono, l'indirizzo e le informazioni di contatto pertinenti di ciascun partecipante.

Visita di screening:

Lo screening dei partecipanti verrà eseguito entro 14 giorni dall'iscrizione. Verrà somministrato un dettagliato questionario demografico e sanitario di base. Verranno prelevati dieci ml di sangue per le valutazioni di base: emocromo completo, test degli anticorpi HIV, test dell'ag di superficie dell'epatite B, test di funzionalità renale ed epatica e conservazione del sangue nel biorepository. Gli esami del sangue e della chimica verranno utilizzati per escludere i soggetti con qualsiasi test di laboratorio anormale tra conta dei neutrofili, emoglobina, piastrine, AST o ALT. Un test anormale sarà definito come Grado ≥3 dalla DAIDS Table for Grading the Severity of Adult and Pediatric Adverse Events, Version 2.0 Nov. 2014). I risultati dell'esame clinico e delle valutazioni di laboratorio di base saranno rivisti per i criteri di inclusione/esclusione.

Iscrizione:

Tutte le visite di ingresso inizieranno il lunedì mattina. Dopo aver ricevuto informazioni approfondite sul programma dello studio, i soggetti che soddisfano i criteri di inclusione verranno arruolati e randomizzati (1:1:1) in uno dei 3 gruppi per ricevere un numero controllato di dosi di Truvada® (Gilead Sciences Inc.), che contiene tenofovir disoproxil fumarato (TDF, 300 mg) ed emtricitabina (FTC, 200 mg) per 6 settimane. Al partecipante verrà spiegato attentamente il programma di dosaggio dei farmaci, il programma delle visite e i potenziali effetti collaterali dei farmaci.

Arruolaremo un totale di 30 adulti con campioni PK valutabili (10 per gruppo). Tutti i partecipanti inizieranno il TDF la mattina della visita di ingresso. Il periodo di trattamento di 6 settimane è stato scelto per garantire concentrazioni di tenofovir nelle diverse matrici (es. sangue, plasma, urina, PBMC) imitano le condizioni attese nei pazienti con dosaggio cronico di perfetta, mediana e bassa aderenza al farmaco. Il programma di prelievo di sangue/urina si basa sull'emivita plasmatica di tenofovir riportata e sui risultati di precedenti studi farmacocinetici.

Le concentrazioni di tenofovir saranno determinate in ciascun partecipante durante tre fasi dello studio (1) periodo iniziale, (2) campionamento PK intensivo e (3) periodo di wash-out.

Fase 1: periodo iniziale (ingresso a 6 settimane) Visita prima della seconda dose: immediatamente prima della seconda dose (es. Gruppo 1: 24 ore dopo la somministrazione (giorno 2; martedì mattina); Gruppo 2: 48 ore dopo la somministrazione (giorno 3; mercoledì mattina); e Gruppo 3; 72 ore dopo la somministrazione (giorno 4; giovedì mattina) il soggetto tornerà in ospedale. Verrà prelevato un singolo campione di sangue (5 ml). Da questo campione di sangue venoso, verranno preparati 5 spot di sangue essiccato (50 µL/spot) su una carta da filtro Whatman 903. Il sangue rimanente verrà centrifugato e il plasma conservato. Verrà raccolto un singolo campione di sangue intero prelevato dal polpastrello e su una seconda carta da filtro Whatman 903 verranno preparati 2 spot di sangue essiccato (50 µL/spot). Verrà prelevato un sangue separato da 10 mL per raccogliere PBMC per la determinazione delle concentrazioni intracellulari di tenofovir-DP. Infine, verrà raccolto un campione di urina spot (5-10 mL). Tutti i campioni saranno conservati a una temperatura compresa tra -70°C e -80°C.

Settimane 3 e 5 (entrambi lunedì mattina, pre-dose): verrà prelevato un singolo campione di sangue (5 ml) prima della somministrazione della dose. Da questo campione di sangue venoso, verranno preparati 5 spot di sangue essiccato (50 µL/spot) su una carta da filtro Whatman 903. Il sangue rimanente verrà centrifugato e il plasma conservato. Verrà raccolto un singolo campione di sangue intero prelevato dal polpastrello e verranno preparati 2 spot di sangue essiccato (50 µL/spot) su una seconda carta da filtro Whatman 903. Verrà prelevato un sangue separato da 10 mL per raccogliere PBMC per la determinazione delle concentrazioni intracellulari di tenofovir-DP. Infine, verrà raccolto un campione di urina spot (5-10 mL). Tutti i campioni saranno conservati a una temperatura compresa tra -70°C e -80°C. Saranno eseguiti test di funzionalità renale ed epatica.

Fase 2: Campionamento PK intensivo (a partire dal lunedì mattina della settimana 7 per 24 ore) Settimana 7 Visita PK intensiva: il lunedì mattina della settimana 7, i soggetti torneranno in ospedale la mattina presto. Un ufficiale medico effettuerà un esame fisico e il sangue verrà prelevato per le valutazioni di sicurezza di laboratorio (AST e ALT). Seguendo il normale programma giornaliero mattutino di assunzione del farmaco, verrà prelevato un campione di sangue pre-dose e verrà somministrata una singola compressa di Truvada® a stomaco vuoto (almeno 6 ore di digiuno prima). Questa sarà l'ultima dose di Truvada® per tutti i soggetti. Il sangue venoso (3 ml/punto temporale) verrà raccolto a 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 24 ore dopo la somministrazione. Ad ogni punto temporale, verranno raccolti un DBS di sangue venoso (5 punti) e un polpastrello (2 punti). Saranno eseguiti test di funzionalità renale ed epatica.

I campioni di urina verranno raccolti prima della somministrazione e negli intervalli di 0-4 ore, 4-8 ore, 8-12 ore e 12-24 ore. I soggetti riceveranno un prelievo di sangue aggiuntivo di 10 ml prima della dose e le PBMC verranno raccolte e conservate a una temperatura compresa tra -70 °C e -80 °C. Dopo 24 ore, il partecipante verrà dimesso dall'ospedale. Al soggetto verrà chiesto di raccogliere tutta la sua urina fino alla prossima visita di studio in 24 ore.

Fase 3: campionamento farmacocinetico di wash-out (settimane dalla settimana 7 alla settimana 10) Settimana 7 (da mercoledì a sabato): dopo il completamento del campionamento PK intensivo, i partecipanti torneranno in clinica una volta al giorno per i successivi 4 giorni (ovvero fino al sabato della settimana 7) per un singolo prelievo di sangue venoso (5 ml), prelievo di un campione di sangue secco con puntura del dito e un campione di urina spot (5-10 ml). Al soggetto verrà chiesto di raccogliere tutta la sua urina fino alla prossima visita clinica.

Settimana 8 (lunedì e giovedì): il lunedì e il giovedì della settimana 8 verranno prelevati un singolo prelievo di sangue venoso, una raccolta di campioni di sangue secco con puntura del dito e un campione di urina spot (5-10 ml). Un singolo campione di PBMC (10 ml di sangue) verrà raccolto lunedì mattina della settimana 8 (ovvero 1 settimana dall'ultima dose di TDF).

Settimana 9 (lunedì): lunedì verranno prelevati un singolo prelievo di sangue venoso, una raccolta di campioni di sangue secco con puntura del dito e un campione di urina spot (5-10 ml). Un singolo campione di PBMC (10 ml di sangue) verrà raccolto anche lunedì (ovvero 2 settimane dall'ultima dose di TDF).

Settimana 10 (lunedì): lunedì verranno prelevati un singolo prelievo di sangue venoso, una raccolta di campioni di sangue secco con puntura del dito e un campione di urina spot (5-10 ml). Un singolo campione di PBMC (10 ml di sangue) verrà raccolto anche lunedì mattina (ovvero 3 settimane dall'ultima dose di TDF).

Visita di fine studio (es. fine della settimana 10):

Lunedì verranno prelevati un singolo prelievo di sangue venoso, una raccolta di campioni con puntura del dito per la macchia di sangue essiccato e un test delle urine a macchia (5-10 ml). Un singolo campione di PBMC (10 ml di sangue) verrà raccolto anche lunedì (ovvero 4 settimane dall'ultima dose di TDF). Verranno eseguiti test di funzionalità renale ed epatica.

A questo punto i partecipanti avranno completato lo studio e non verranno eseguite ulteriori valutazioni.

Le concentrazioni di tenofovir saranno misurate utilizzando saggi convalidati di cromatografia liquida-spettrometria di massa a triplo quadrupolo (LC-MS/MS) presso la Faculty of Associated Medical Sciences dell'Università di Chiang Mai. Le concentrazioni intracellulari di tenofovir-difosfato (TFV-DP) saranno determinate utilizzando un test validato basato su LC-MS.