Adesão ao tenofovir para orientar e avaliar rapidamente a PrEP e a terapia do HIV (TARGET)

Objetivos do estudo

Objetivo primário:

• Determinar a farmacocinética do tenofovir (TFV) no sangue, urina e plasma em adultos com adesão perfeita, mediana e baixa ao tenofovir disoproxil fumarato (TDF).

Objetivos Secundários

• Determinar a taxa de eliminação do tenofovir no sangue, plasma e urina entre os participantes com vários níveis de adesão ao TDF.
• Determinar as concentrações de estado estacionário de TFV no sangue e no plasma entre os níveis controlados de adesão ao TDF.
• Comparar a concordância entre as concentrações de TFV no sangue, plasma e urina.
• Determinar as concentrações mínimas intracelulares de tenofovir-difosfato (TFV-DP) em amostras de células mononucleares de sangue periférico (PBMC) e amostras de sangue seco (DBS) em adultos com adesão perfeita, mediana e baixa aos medicamentos.
• Identificar possíveis limiares de concentração para a interpretação clínica de um teste binário de adesão no local de atendimento para medição de TFV (e/ou TFV-DP) em relação à adesão ao TDF.

Projeto:

O desenho do estudo é um estudo farmacocinético randomizado e aberto em voluntários adultos saudáveis. O estudo envolve a coleta de dados clínicos e amostras biológicas, e os participantes fornecerão consentimento informado por escrito para participar. Serão inscritos voluntários adultos saudáveis ​​(sorologia HIV e Ag de superfície para hepatite B negativos). Uma vez obtido o consentimento por escrito, a visita de triagem será realizada. A equipe do estudo obterá o número de telefone, endereço e informações de contato relevantes de cada participante.

Visita de Triagem:

A triagem dos participantes será realizada em até 14 dias após a inscrição. Um questionário demográfico e de saúde detalhado será administrado. Dez mL de sangue serão coletados para avaliações iniciais: hemograma completo, teste de anticorpos para HIV, teste de Ag de superfície para hepatite B, testes de função renal e hepática e armazenamento de sangue no biorrepositório. Os exames de sangue e química serão usados ​​para excluir indivíduos com qualquer teste laboratorial anormal entre contagem de neutrófilos, hemoglobina, plaquetas, AST ou ALT. Um teste anormal será definido como Grau ≥3 pela Tabela DAIDS para Classificação da Gravidade de Eventos Adversos Adultos e Pediátricos, Versão 2.0 Nov. 2014). Os resultados do exame clínico e das avaliações laboratoriais basais serão revisados ​​quanto aos critérios de inclusão/exclusão.

Entrada:

Todas as visitas de entrada começarão na manhã de segunda-feira. Depois de receber informações detalhadas sobre o cronograma do estudo, os indivíduos que atenderem aos critérios de inclusão serão inscritos e randomizados (1:1:1) em um dos 3 grupos para receber um número controlado de doses de Truvada® (Gilead Sciences Inc.), que contém tenofovir disoproxil fumarato (TDF, 300 mg) e emtricitabina (FTC, 200 mg) durante 6 semanas. O participante será cuidadosamente explicado sobre seu esquema de dosagem de medicamentos, cronograma de visitas e possíveis efeitos colaterais do medicamento.

Inscreveremos um total de 30 adultos com amostras PK avaliáveis ​​(10 por grupo). Todos os participantes começarão o TDF na manhã da visita de entrada. O período de tratamento de 6 semanas foi escolhido para garantir as concentrações de tenofovir nas diferentes matrizes (i.e. sangue, plasma, urina, PBMCs) mimetizam as condições esperadas em pacientes com dosagem crônica de perfeita, mediana e baixa adesão ao medicamento. O cronograma de amostragem de sangue/urina é baseado na meia-vida plasmática relatada do tenofovir e nos resultados de estudos PK anteriores.

As concentrações de tenofovir serão determinadas em cada participante durante três fases do estudo (1) período inicial, (2) amostragem farmacocinética intensiva e (3) período de eliminação.

Fase 1: Período de introdução (entrada em 6 semanas) Visita antes da 2ª dose: imediatamente antes da segunda dose (ou seja, Grupo 1: 24 pós-dose (Dia #2; terça-feira de manhã); Grupo 2: 48 horas pós-dose (Dia #3; Quarta-feira de manhã); e Grupo 3; 72 horas após a dose (Dia #4; Quinta-feira de manhã) o indivíduo retornará ao hospital. Uma única amostra de sangue será coletada (5 mL). A partir desta amostra de sangue venoso, 5 gotas de sangue seco (50 µL/ponto) serão preparadas em um cartão de papel filtro Whatman 903. O sangue restante será centrifugado e o plasma armazenado. Uma única amostra de sangue total de picada no dedo será coletada e em um segundo cartão de papel de filtro Whatman 903 serão preparados 2 pontos de sangue seco (50 µL/ponto). Uma amostra separada de 10 mL de sangue será coletada para coletar PBMCs para determinação das concentrações intracelulares de tenofovir-DP. Por fim, será coletada uma amostra pontual de urina (5-10 mL). Todas as amostras serão armazenadas entre -70°C e -80°C.

Semanas 3 e 5 (ambas na segunda-feira de manhã, pré-dose): Uma única amostra de sangue será coletada (5 mL) antes da administração da dose. A partir desta amostra de sangue venoso, 5 gotas de sangue seco (50 µL/ponto) serão preparadas em um cartão de papel filtro Whatman 903. O sangue restante será centrifugado e o plasma armazenado. Uma única amostra de sangue total de picada no dedo será coletada e 2 manchas de sangue seco (50 µL/ponto) serão preparadas em um segundo cartão de papel de filtro Whatman 903. Uma amostra separada de 10 mL de sangue será coletada para coletar PBMCs para determinação das concentrações intracelulares de tenofovir-DP. Por fim, será coletada uma amostra pontual de urina (5-10 mL). Todas as amostras serão armazenadas entre -70°C e -80°C. Serão realizados testes de função renal e hepática.

Fase 2: Amostragem de PK intensiva (começando na segunda-feira de manhã da Semana 7 por 24 horas) Semana 7 Visita de PK intensiva: Na manhã de segunda-feira da Semana 7, os indivíduos retornarão ao hospital no início da manhã. Um médico realizará um exame físico e sangue será coletado para avaliações laboratoriais de segurança (AST e ALT). Seguindo o horário matinal normal de ingestão do medicamento, uma amostra de sangue pré-dose será coletada e um único comprimido de Truvada® será administrado com o estômago vazio (pelo menos 6 horas antes). Esta será a última dose de Truvada® para todos os indivíduos. Sangue venoso (3 mL/ponto de tempo) será coletado em 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 24 horas após a dose. Em cada ponto de tempo, um DBS de sangue venoso (5 pontos) e uma picada no dedo (2 pontos) serão coletados. Serão realizados testes de função renal e hepática.

Amostras de urina serão coletadas antes da dose e nos intervalos de 0-4 horas, 4-8 horas, 8-12 horas e 12-24 horas. Os indivíduos terão uma pré-dose adicional de 10 mL de sangue coletado e PBMCs serão coletados e armazenados de -70°C a -80°C. Após 24 horas, o participante terá alta hospitalar. O sujeito será solicitado a coletar toda a sua urina até a próxima visita do estudo em 24 horas.

Fase 3: Amostragem farmacocinética de wash-out (semanas 7 a semana 10) Semana 7 (quarta-feira a sábado): Após a conclusão da amostragem farmacocinética intensiva, os participantes retornarão à clínica uma vez por dia durante os próximos 4 dias (ou seja, até o sábado da Semana 7) para uma única coleta de sangue venoso (5mL), coleta de amostra por picada no dedo para mancha de sangue seco e uma amostra de urina (5-10 mL). O sujeito será solicitado a coletar toda a sua urina até a próxima visita à clínica.

Semana 8 (segunda e quinta): Uma única coleta de sangue venoso, coleta de amostra por picada no dedo para mancha de sangue seco e uma amostra de urina (5-10 mL) serão coletadas na segunda e quinta-feira da semana 8. Uma única amostra de PBMC (10 mL de sangue) será coletada na segunda-feira de manhã da semana 8 (ou seja, 1 semana desde a última dose de TDF).

Semana 9 (segunda-feira): Uma única coleta de sangue venoso, coleta de amostra por picada no dedo para mancha de sangue seco e uma amostra de urina (5-10 mL) serão coletadas na segunda-feira. Uma única amostra de PBMC (10 mL de sangue) também será coletada na segunda-feira (ou seja, 2 semanas desde a última dose de TDF).

Semana 10 (segunda-feira): Uma única coleta de sangue venoso, coleta de amostra por picada no dedo para mancha de sangue seco e uma amostra de urina (5-10 mL) serão coletadas na segunda-feira. Uma única amostra de PBMC (10 mL de sangue) também será coletada na manhã de segunda-feira (ou seja, 3 semanas desde a última dose de TDF).

Visita de fim de estudo (ou seja, final da Semana 10):

Uma única coleta de sangue venoso, coleta de amostra de picada no dedo para mancha de sangue seco e um teste de urina (5-10 mL) serão coletados na segunda-feira. Uma única amostra de PBMC (10 mL de sangue) também será coletada na segunda-feira (ou seja, 4 semanas desde a última dose de TDF). Serão realizados testes de função renal e hepática.

Neste momento, os participantes terão concluído o estudo e nenhuma avaliação adicional será realizada.

As concentrações de tenofovir serão medidas usando ensaios validados de espectrometria de massa de cromatografia líquida tripla quadrupolo (LC-MS/MS) na Faculdade de Ciências Médicas Associadas da Universidade de Chiang Mai. As concentrações intracelulares de tenofovir-difosfato (TFV-DP) serão determinadas usando um ensaio baseado em LC-MS validado.