- ICH GCP
- Registro degli studi clinici negli Stati Uniti
- Sperimentazione clinica NCT04520165
Effetto dei prodotti biologici sulle funzioni alternative degli eosinofili nell'asma grave
Effetto dell'anti-IL5 e dell'anti-IgE sulle funzioni alternative degli eosinofili nell'asma grave
Panoramica dello studio
Stato
Condizioni
Descrizione dettagliata
L'asma grave si osserva nel 3-5% della popolazione asmatica ed è caratterizzato da un più alto tasso di riacutizzazioni, asma scarsamente controllato e/o scarsa funzionalità polmonare. Negli ultimi dieci anni, anti-IgE e anti-IL5 (e anti-IL5R) hanno notevolmente migliorato lo stato di asma grave. Il trattamento con un ciclo cronico o orale di corticosteroidi è infatti responsabile di molti effetti collaterali. Vi è tuttavia una mancanza di biomarcatori per la previsione dei responder all'anti-IL5 e all'anti-IgE.
In precedenza abbiamo scoperto che la conta degli eosinofili nell'espettorato è un buon predittore del miglioramento della funzionalità polmonare degli asmatici gravi utilizzando l'anti-IL5 (Schleich et al, in press in Clin Exp Allergy 2020). Le cellule dell'espettorato potrebbero non essere l'unico marker dell'espettorato rilevante per i responder al mepolizumab.
L'obiettivo è valutare la capacità delle citochine dell'espettorato (livelli proteici e geni) (IL-3, IL-4, IL-5, IL-13, IL-33 e GM-CSF) di predire la risposta degli asmatici gravi dopo 6 mesi di trattamento con farmaci biologici in termini di riduzione delle riacutizzazioni e dell'uso di corticosteroidi, miglioramento del FEV1, controllo dell'asma, qualità della vita dell'asma ed effetto sull'espettorato e sull'infiammazione del sangue.
Gli asmatici gravi osservati nella Clinica per l'Asma del CHU di Liegi sono molto ben caratterizzati utilizzando la misurazione basale di campioni di sangue, espettorato indotto, funzionalità polmonare, FeNO, questionari per il controllo dell'asma (ACT - ACQ) e questionari sulla qualità della vita dell'asma (AQLQ).
Vengono inoltre registrati i dati sulle riacutizzazioni durante l'anno precedente e sul trattamento inalatorio e orale in corso. Se il valore del FEV1 è superiore al 70% del valore predetto, gli asmatici gravi eseguono anche un test con metacolina per valutare l'iperreattività bronchiale.
Tutte queste misure vengono ripetute dopo 6 mesi di trattamento con mepolizumab. Tutti i surnatanti dell'espettorato vengono conservati a -80°C ed è disponibile anche l'RNA delle cellule dell'espettorato.
Dimensione del campione target: 50 pazienti
Intendiamo misurare diverse citochine nell'espettorato (IL3, GM-CSF, IL5, IL-13, IL-33, IL-4…) e valutare la loro capacità di predire la risposta dopo 6 mesi di trattamento con diversi biologici in termini di riduzione delle riacutizzazioni e dell'uso di corticosteroidi, miglioramento del FEV1 (+200 ml), del controllo dell'asma (diminuzione dell'ACQ >0,5, aumento dell'ACT >3), della qualità della vita dell'asma (aumento del punteggio AQLQ >0,5) e dell'effetto sull'espettorato e sul sangue infiammazione.
I pazienti asmatici vengono reclutati attraverso l'ambulatorio e il centro di riabilitazione polmonare (CHU, Sart-Tilman, Liegi). L'asma viene diagnosticato come descritto nelle linee guida GINA (http://ginasthma.org/).
Induzione ed elaborazione dell'espettorato. L'espettorato viene indotto ed elaborato come descritto in precedenza (Delvaux Thorax 2014). L'intero espettorato viene raccolto in un contenitore di plastica, pesato e omogeneizzato con tre volumi di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), vortexato per 30 s e centrifugato a 800 g per 10 min a 4° C. Il surnatante viene separato dalla cellula pellet per filtrazione attraverso 2 strati di garza sterile. Viene eseguita una mucolisi aggiungendo un volume uguale di 6,5 mM ditiotreitolo e la sospensione viene agitata per 20 min. Dopo una centrifugazione di 10 minuti a 550 g, le cellule squamose e la conta cellulare totale, nonché la vitalità cellulare, vengono controllate mediante esclusione del tripan blu con un emocitometro manuale. La conta leucocitaria differenziale viene eseguita su cytospin colorati con May-Grünwald-Giemsa su 500 cellule.
Se i criteri di qualità (< 30% di cellule squamose e vitalità > 50%) vengono rispettati, il pellet cellulare viene miscelato con 5 volumi di reagente cellulare RNAprotect (Qiagen, Hilden, Germania) e mantenuto a -80 ° C fino all'estrazione dell'RNA.
In totale, verranno analizzati 50 pazienti con campioni surnatanti di espettorato indotti con successo prima della terapia anti-IL-5, anti-IL5R o anti-IgE e 6 mesi dopo. Per quanto riguarda le cellule dell'espettorato, i pazienti con campioni di buona qualità prima e dopo la terapia consentiranno l'analisi dell'espressione genica.
Dosaggi immunologici: le concentrazioni dei mediatori contenuti nel supernatante dell'espettorato sono valutate mediante saggio di performance ELISA Luminex (sistemi R e D, Minneapolis, USA) secondo le istruzioni del produttore. Vengono eseguiti esperimenti di spiking di citochine nei supernatanti dell'espettorato per verificare che il recupero sia compreso tra l'80% e il 120% per tutti gli analiti.
Estrazione dell'RNA e metodi RT-qPCR I livelli della proteina mediatrice saranno ottenuti utilizzando il kit di scoperta Luminex performance XL (sistemi R e D, Minneapolis, USA) per IL-3 e IL-4 (limite di rilevazione: 0.09 pg/ml per entrambi). Verrà utilizzato un kit di prestazioni ad alta sensibilità Luminex per IL-5, IL-13, IL-33 e GM-CSF. I limiti di rilevamento sono rispettivamente di 0,4, 5,1, 1,8 e 1,6 pg/ml.
Per quanto riguarda i livelli di espressione genica del mediatore, i passaggi saranno eseguiti esattamente come descritto di recente. I primer e le sonde saranno tutti ottenuti da IDT (Integrated DNA Technologies, Skokie, IL, USA). Le efficienze della PCR saranno calcolate utilizzando il software di analisi qbase+ qPCR (Biogazelle, Zwijnaarde, Belgio). Lo stesso programma sarà utilizzato per ottenere la quantificazione relativa dell'espressione genica utilizzando il metodo 2-∆∆Ct. HPRT1 e GNB2L1 saranno usati come geni di riferimento come riportato in precedenza. I pazienti saranno confrontati con una coorte di 7 soggetti sani.
Questi passaggi vengono eseguiti secondo la descrizione di da Silva et al [Clin Exp allergy 2017] tranne per il fatto che il passaggio Taqman PCR viene eseguito in piastre da 96 pozzetti e che per ciascun campione vengono utilizzati 2 µl di cDNA (diluito 1:4) in un volume di reazione totale di 12,5 µl inclusi primer forward da 500 nM, primer reverse da 500 nM e sonda da 250 nM per tutti i geni testati. Ogni qPCR è realizzato in duplicato e include controlli non templati per ciascun gene. L'amplificazione viene eseguita su LightCycler 480 Real-Time PCR (Roche, Pleasanton, CA, USA) durante 45 cicli come segue: fase di attivazione iniziale: 95 ° C per 15 min; fase di denaturazione: 94 °C per 15 s; fase di ricottura e allungamento: 60 °C per 1 min. I primer e le sonde sono tutti etichettati con coloranti reporter e double-quencher 5'6-carbossifluoresceina/ZEN/3' Iowa black FQ (5'6-FAM/ZEN/3'IBFQ) e sono stati ottenuti da IDT (Integrated DNA Technologies, Skokie , IL, USA). Le curve standard vengono generate per ciascun gene utilizzando una diluizione seriale 4 volte del cDNA stock (pool di 4 cDNA) per verificare che tutte le efficienze PCR ottenute siano comprese tra 1,9 e 2,1. La contaminazione del DNA genomico è controllata eseguendo qPCR con ogni campione di RNA senza passaggio RT. La quantificazione relativa nell'espressione genica viene determinata utilizzando il software di analisi qbase+ qPCR (Biogazelle, Zwijnaarde, Belgio) utilizzando il metodo 2-∆∆Ct. HPRT1 e GNB2L1 sono usati come geni di riferimento come precedentemente determinato. Tutta la procedura viene eseguita secondo le linee guida MIQE per le informazioni minime richieste per un esperimento qPCR.
Le citochine saranno misurate anche nel sangue di un sottogruppo di pazienti.
Endpoint dello studio
Punto finale principale:
Identificare i predittori di riduzione delle riacutizzazioni e della dose di corticosteroidi orali.
Endpoint secondario:
Per identificare i predittori di miglioramento in ACQ (-0,5), ACT (+3 punti), AQLQ (+ 0,5), eosinofili nell'espettorato (<3%), FEV1 (+ 200 ml).
Piano statistico o analisi dei dati I risultati saranno espressi come media¡SD o media¡SEM per variabili continue; mediana (intervallo) per distribuzioni asimmetriche. Per le variabili categoriali, il numero di osservazioni e le percentuali saranno fornite in ciascuna categoria. I confronti tra diversi sottogruppi saranno eseguiti con un test di Kruskal-Wallis o un paired t-test / Wilcoxon Signed rank test. Il coefficiente di correlazione di Spearman sarà utilizzato per misurare l'associazione tra i parametri clinici.
I calcoli di potenza hanno indicato una dimensione totale del campione richiesta di 50 soggetti per confermare un cambiamento nei risultati.
Tipo di studio
Iscrizione (Anticipato)
Contatti e Sedi
Luoghi di studio
-
-
Liege
-
Liège, Liege, Belgio, 4000
- Reclutamento
- CHU Liege
-
-
Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Sessi ammissibili allo studio
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Descrizione
Criterio di inclusione:
- Asmatici gravi visitati presso la Clinica per l'Asma del CHU di Liegi che accettano di sottoporsi a visita completa al basale e dopo 6 mesi di trattamento con un biologico e firmare il consenso informato.
Criteri di esclusione:
- nessuno
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Modelli osservazionali: Coorte
- Prospettive temporali: Prospettiva
Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
---|---|---|
misurazione dei mediatori del sangue e dell'espettorato nei pazienti con riduzione delle riacutizzazioni e della dose di corticosteroidi orali.
Lasso di tempo: dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
riduzione della dose di corticosteroidi orali cronici o del numero di riacutizzazioni definite come corticosteroidi orali per almeno tre giorni consecutivi per un aumento dei sintomi dell'asma.
|
dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
---|---|---|
misurazione dei mediatori del sangue e dell'espettorato nei pazienti con miglioramento dell'ACQ
Lasso di tempo: Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
miglioramento del controllo dell'asma.
Ai pazienti viene chiesto di ricordare com'è stata la loro asma durante la settimana precedente e di rispondere al sintomo e al broncodilatatore utilizzando domande su una scala a 7 punti (0=nessuna compromissione, 6= massima compromissione).
Le domande hanno lo stesso peso e il punteggio ACQ è la media delle 7 domande e quindi compreso tra 0 (totalmente controllato) e 6 (gravemente non controllato).
Un miglioramento corrisponde ad una diminuzione di almeno 0,5 rispetto all'ultima valutazione.
|
Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
misurazione dei mediatori del sangue e dell'espettorato nei pazienti con miglioramento dell'ACT
Lasso di tempo: Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
Test di controllo dell'asma (ACT).
Ai pazienti viene chiesto di ricordare come è stata la loro asma durante le quattro settimane e di rispondere al sintomo e al broncodilatatore utilizzando domande su una scala a 5 punti.
Il punteggio va da 5 (scarso controllo dell'asma) a 25 (controllo completo dell'asma).
Un miglioramento corrisponde ad un aumento di almeno 3 punti del punteggio ACT.
|
Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
misurazione dei mediatori del sangue e dell'espettorato nei pazienti con miglioramento dell'AQLQ
Lasso di tempo: Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
Questionario sulla qualità della vita dell'asma (AQLQ).
32 articoli con richiamo di 2 settimane.
Il punteggio varia da 1 a 7, con un punteggio più alto che indica una migliore qualità della vita.
Un miglioramento corrisponde ad un aumento di almeno 0,5 punti nel punteggio AQLQ
|
Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
misurazione dei mediatori del sangue e dell'espettorato in pazienti con normalizzazione della conta degli eosinofili nell'espettorato
Lasso di tempo: Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
diminuzione superiore al 50% o conta degli eosinofili nell'espettorato <3%
|
Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
misurazione dei mediatori del sangue e dell'espettorato in pazienti con miglioramento della funzione polmonare
Lasso di tempo: Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
Il volume espiratorio forzato in un secondo (FEV1) aumenta di almeno 200 ml
|
Dopo 6 mesi e 1 anno di follow-up
|
Collaboratori e investigatori
Sponsor
Pubblicazioni e link utili
Pubblicazioni generali
- Moermans C, Deliege E, Pirottin D, Poulet C, Guiot J, Henket M, da Silva J, Louis R. Suitable reference genes determination for real-time PCR using induced sputum samples. Eur Respir J. 2019 Dec 4;54(6):1800644. doi: 10.1183/13993003.00644-2018. Print 2019 Dec.
- Delvaux M, Henket M, Lau L, Kange P, Bartsch P, Djukanovic R, Louis R. Nebulised salbutamol administered during sputum induction improves bronchoprotection in patients with asthma. Thorax. 2004 Feb;59(2):111-5. doi: 10.1136/thorax.2003.011130.
- Schleich F, Graff S, Nekoee H, Moermans C, Henket M, Sanchez C, Paulus V, Guissard F, Donneau AF, Louis R. Real-word experience with mepolizumab: Does it deliver what it has promised? Clin Exp Allergy. 2020 Jun;50(6):687-695. doi: 10.1111/cea.13601. Epub 2020 Apr 14.
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio (EFFETTIVO)
Completamento primario (EFFETTIVO)
Completamento dello studio (ANTICIPATO)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (EFFETTIVO)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (EFFETTIVO)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
Altri numeri di identificazione dello studio
- 214077
Informazioni su farmaci e dispositivi, documenti di studio
Studia un prodotto farmaceutico regolamentato dalla FDA degli Stati Uniti
Studia un dispositivo regolamentato dalla FDA degli Stati Uniti
Queste informazioni sono state recuperate direttamente dal sito web clinicaltrials.gov senza alcuna modifica. In caso di richieste di modifica, rimozione o aggiornamento dei dettagli dello studio, contattare register@clinicaltrials.gov. Non appena verrà implementata una modifica su clinicaltrials.gov, questa verrà aggiornata automaticamente anche sul nostro sito web .
Prove cliniche su Asma grave
-
Acibadem UniversityCompletatoAndatura | Malattia di Sever | Apofisite calcanealeTacchino
-
University of Colorado, DenverCompletato
-
Fundacion PodoactivaCompletatoMalattia di Sever | Apofisite calcanealeSpagna
-
University of DelawareReclutamentoMalattia di Sever | Tendinopatia d'Achille | Tendinopatia inserzionale dell'Achille | Apofisite; CalcaneoStati Uniti
-
Ann & Robert H Lurie Children's Hospital of ChicagoAmerican Medical Society for Sports MedicineSconosciutoSindrome di Osgood-Schlatter | Sinding-Larsen e sindrome di Johansson | Malattia di Sever | ApofisiteStati Uniti