Marcatori Immunitari Circolanti per la Valutazione Prognostica nei Pazienti con Cancro al Polmone Postoperatori

Il carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC) rimane la principale causa di mortalità correlata al cancro in tutto il mondo, con la resezione chirurgica che rappresenta l'approccio curativo per gli stadi precoci e intermedi. Tuttavia, i tassi di recidiva postoperatoria sono elevati negli stadi IB (con caratteristiche di alto rischio come tumore >4 cm, scarsa differenziazione, invasione pleurica viscerale, invasione vascolare o resezione a cuneo) fino a IIIB, rendendo necessari strumenti prognostici migliorati oltre la stadiazione TNM per ottimizzare le terapie adiuvanti come la chemioterapia o l'immunoterapia.

Questo studio indaga i marcatori immunitari del sangue periferico come indicatori prognostici non invasivi. Le cellule T effettrici antigene-specifiche (ETAST) vengono identificate tramite citometria a flusso multiparametrica, co-esprimendo CD137 (un marcatore di attivazione delle cellule T) e IFN-γ (una citochina effettore) dopo stimolazione ex vivo con antigeni associati al tumore. Il rapporto tra cellule T effettrici e cellule T regolatorie (Teff/Treg) riflette l'omeostasi immunitaria sistemica, con squilibri che promuovono l'evasione immunitaria del tumore.

I campioni di sangue (circa 10 mL) vengono raccolti preoperatoriamente tramite venipuntura e processati entro 4 ore. Le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) vengono isolate utilizzando la centrifugazione a gradiente di densità Ficoll. Per il rilevamento delle ETAST, le PBMC vengono sottoposte a stimolazione con un pool di peptidi di antigeni comuni dell'NSCLC (ad esempio, NY-ESO-1, MAGE-A3) per 6 ore in presenza di brefeldina A, seguite da colorazione intracellulare e analisi su un citometro a flusso BD FACSCanto II. Le cellule Teff sono definite come cellule T CD4+ o CD8+ che esprimono IFN-γ, TNF-α o IL-2; le cellule Treg come CD4+CD25+FoxP3+. L'acquisizione dei dati mira ad almeno 100.000 eventi per campione, con analisi utilizzando il software FlowJo.

Il follow-up include valutazioni cliniche ogni 3 mesi per i primi 2 anni, poi ogni 6 mesi fino a 3 anni, monitorando la recidiva tramite scansioni TC, PET-TC se indicato, e endpoint di sopravvivenza. Le analisi esplorative possono incorporare il sequenziamento di nuova generazione per mutazioni driver (ad esempio, EGFR, ALK) dal tessuto tumorale per correlare con i profili immunitari.

Le considerazioni etiche danno priorità alla sicurezza dei partecipanti, con tutte le procedure approvate dal comitato di revisione istituzionale. I dati sono de-identificati e archiviati in modo sicuro, conformemente agli standard GCP.