Szczepienie pacjentów z czerniakiem komórkami dendrytycznymi obciążonymi allogenicznymi komórkami czerniaka apoptotyczno-nekrotycznego

Tło: Szesnastu pacjentów z czerniakiem (1 stadium IIC, 8 stadium III i 7 stadium IV) leczono w badaniu fazy I w celu oceny bezpieczeństwa i odpowiedzi immunologicznej szczepionką (DC/Apo-Nec) złożoną z autologicznych komórek dendrytycznych (DCs) ) załadowane mieszaniną apoptotycznych/nekrotycznych linii komórkowych czerniaka (Apo-Nec).

Metody: PBMC uzyskano z leukaferezy, a DC uzyskano z monocytów hodowanych w obecności GM-CSF i IL-4 w pożywce wolnej od surowicy. Niedojrzałe DC (iDC) załadowano komórkami Apo-Nec napromieniowanymi promieniowaniem gamma i wstrzyknięto id bez adiuwanta. Kohorty czterech pacjentów otrzymały cztery szczepionki po 5, 10, 15 lub 20 x106 DC/Apo-Nec na szczepionkę w odstępie dwóch tygodni.

Wyniki: Szczepionka była dobrze tolerowana przez wszystkich chorych. Toksyczność szczepionki była łagodna, a dawka ograniczająca toksyczność nie została osiągnięta. Stwierdziliśmy, że 42,3 ± 13,7% iDC pacjentów z czerniakiem było zdolnych do fagocytowania komórek Apo-Nec, które indukowały dojrzewanie DC, o czym świadczy zwiększona ekspresja CD83, CD80, CD86, HLA klasy I i II w porównaniu z iDC. Również po fagocytozie zaobserwowano zmniejszenie endocytozy dekstran-FITC o 75,2 ± 16% w porównaniu z iDC. CCR7 był regulowany w górę po fagocytozie Apo-Nec w DC od wszystkich pacjentów i odpowiednio komórki DC/Apo-Nec in vitro były zdolne do migracji w kierunku MIP-3 beta. Wynik DTH wzrósł znacząco u pacjentów po pierwszym szczepieniu i nieznacznie spadł po czwartej szczepionce (test Manna-Whitneya, p<0,05). U pacjentki nr 1 wykryto dodatnią reakcję DTH na jej własne napromieniowane komórki nowotworowe. Obecność limfocytów T CD8+ specyficznych dla gp100 i Melan A/MART-1 Ags badano przez wiązanie tetramerów u pacjentów z HLA-A*0201 (7/15 pacjentów) przed i po szczepieniu. Dwóch pacjentów, u których pozostała NED, po szczepieniu zwiększyło Ags swoiste limfocyty T. Nie wykryto odpowiedzi humoralnej na komórki Apo-Nec. Przy średnim okresie obserwacji wynoszącym 44,5 miesiąca po operacji, pacjent w stadium IIC to NED, 7/8 pacjentów w stadium III to NED, a u 7/7 pacjentów w stadium IV nastąpiła progresja.

Wnioski: Stwierdzamy, że szczepionka DC/Apo-Nec jest dobrze tolerowana, indukuje swoistą odporność przeciwko Ags czerniaka, au pacjentów w III stopniu zaawansowania może wydłużyć przeżycie wolne od choroby, zapewniając ochronę przed nawrotem w leczeniu uzupełniającym.