Zanieczyszczenie tkanki jądra metodą RT-PCR u uczestników z guzami litymi (TESTIMAR)

Niektóre guzy lite mają wysokie ryzyko lokalizacji przerzutów, w tym w jądrach. Istnieją obawy co do możliwej obecności komórek nowotworowych w tkance jądra, które mogłyby spowodować nawrót pierwotnej choroby po reimplantacji. W związku z tym możliwość zajęcia tkanki jąder należy ocenić czułymi metodami molekularnymi.

Opierając się na naszym doświadczeniu w wykrywaniu metodą RT-PCR minimalnej choroby resztkowej (MRD) w nerwiaku niedojrzałym od 1994 r. [Tchirkov et al. 2003] oraz w kriokonserwacji tkanek jąder od 2012 roku, chcemy opracować specyficzną i czułą metodę wykrywania choroby resztkowej za pomocą RT-PCR w celu oceny zanieczyszczenia nowotworem pobranej tkanki jąder.

Populacja badana: Wybraliśmy 3 modele guzów litych wieku dziecięcego o wysokim ryzyku przerzutów, które często wymagają leczenia sterylizacyjnego (chemio i/lub radioterapia): nerwiaka zarodkowego, guza Ewinga i mięsaka prążkowanokomórkowego pęcherzyków płucnych. Wykorzystamy cztery linie komórek nowotworowych: IMR32 i SK-NSH dla nerwiaka niedojrzałego; RD-ES dla guza Ewinga; RH-30 dla mięsaka prążkowanokomórkowego. Planujemy użyć 20 fragmentów na linię.

Czas trwania badania: 12 miesięcy Projekt badania: Zostanie pobrana tkanka jądra bez rozpoznanej złośliwości, ale ze stanem uzasadniającym wykonanie biopsji (ocena płodności).

Pobrana kora jądra zostanie poddana obróbce w celu odzyskania wszystkich zdolnych do życia plemników, a następnie użyjemy pozostałej tkanki do zanieczyszczenia liniami komórek nowotworowych. Następnie wykrycie specyficznego transkryptu zostanie przeprowadzone metodą RT-PCR w świeżej tkance i po zamrożeniu/rozmrożeniu. Całkowity RNA zostanie wyekstrahowany odczynnikiem TRI, a qRT-PCR zostanie przeprowadzony przy użyciu technologii „TaqMan”.

Pierwszorzędowy punkt końcowy: osiągnięcie czułości około 1/106 komórek.