Kontaminering af testikelvæv ved RT-PCR hos deltagere med faste tumorer (TESTIMAR)

Nogle solide tumorer har høj risiko for metastatisk lokalisering, herunder i testikler. Der er bekymring over den mulige tilstedeværelse af ondartede celler i testikelvæv, der kan forårsage en gentagelse af den primære sygdom efter reimplantation. Muligheden for involvering af testikelvæv skal således vurderes med følsomme molekylære metoder.

Baseret på vores erfaring med påvisning ved RT-PCR af minimal residual sygdom (MRD) i neuroblastom siden 1994 [Tchirkov et al. 2003] og inden for kryokonservering af testikelvæv siden 2012, ønsker vi at udvikle en specifik og følsom metode til restsygdomsdetektion ved RT-PCR for at evaluere tumorkontaminationen af ​​testikelhøstet væv.

Undersøgelsespopulation: Vi valgte 3 modeller af pædiatriske solide tumorer med høj risiko for metastaser, og som ofte kræver steriliserende behandlinger (kemo- og/eller strålebehandling): neuroblastom, Ewing-tumor og alveolær rhabdosarkom. Vi vil bruge fire tumorcellelinjer: IMR32 og SK-NSH til neuroblastom; RD-ES for Ewing tumor; RH-30 til rhabdosarkom. Vi planlægger at bruge 20 fragmenter pr. linje.

Undersøgelsesvarighed: 12 måneder Undersøgelsesdesign: Testikelvæv uden kendt malignitet, men med en tilstand, der berettiger en biopsi (fertilitetsvurdering) vil blive høstet.

Den høstede testikelbark vil blive behandlet for at genvinde al levedygtig sæd, og derefter bruger vi resterende væv til at blive kontamineret med tumorcellelinjer. Derefter vil detektion af det specifikke transkript blive udført ved RT-PCR i frisk væv og efter frysning/optøning. Total RNA vil blive ekstraheret med TRI-reagenset og qRT-PCR vil blive udført ved hjælp af "TaqMan" teknologien.

Primært endepunkt: at nå en følsomhed omkring 1/106 celler.