Kontaminering av testikkelvev ved RT-PCR hos deltakere med solide svulster (TESTIMAR)

Noen solide svulster har høy risiko for metastatisk lokalisering, inkludert i testiklene. Det er bekymring for mulig tilstedeværelse av ondartede celler i testikkelvev som kan forårsake tilbakefall av primærsykdommen etter reimplantasjon. Dermed må muligheten for involvering av testikkelvev vurderes med sensitive molekylære metoder.

Basert på vår erfaring med påvisning ved RT-PCR av minimal restsykdom (MRD) i neuroblastom siden 1994 [Tchirkov et al. 2003] og i kryokonservering av testikkelvev siden 2012, ønsker vi å utvikle en spesifikk og sensitiv metode for gjenværende sykdomsdeteksjon ved RT-PCR for å evaluere svulstforurensning av testikkelhøstet vev.

Studiepopulasjon: Vi valgte 3 modeller av pediatriske solide svulster med høy risiko for metastaser og som ofte krever steriliserende behandlinger (kjemoterapi og/eller strålebehandling): nevroblastom, Ewing-svulst og alveolært rhabdosarkom. Vi vil bruke fire tumorcellelinjer: IMR32 og SK-NSH for neuroblastom; RD-ES for Ewing-svulst; RH-30 for rhabdosarkom. Vi planlegger å bruke 20 fragmenter per linje.

Studievarighet: 12 måneder Studiedesign: Testikkelvev uten kjent malignitet, men med en tilstand som tilsier en biopsi (fertilitetsvurdering) vil bli høstet.

Den høstede testikkelbarken vil bli behandlet for å gjenvinne all levedyktig sæd, og deretter bruker vi gjenværende vev for å bli kontaminert med tumorcellelinjer. Deretter vil deteksjon av det spesifikke transkripsjonen gjøres ved RT-PCR i ferskt vev og etter frysing/tine. Totalt RNA vil bli ekstrahert med TRI-reagenset og qRT-PCR vil bli utført ved bruk av "TaqMan"-teknologien.

Primært endepunkt: å nå en følsomhet på ca. 1/106 celler.