Verontreiniging van testikelweefsel door RT-PCR bij deelnemers met solide tumoren (TESTIMAR)

Sommige solide tumoren hebben een hoog risico op metastatische lokalisatie, ook in de testis. Er bestaat bezorgdheid over de mogelijke aanwezigheid van kwaadaardige cellen in testisweefsel die na herimplantatie een herhaling van de primaire ziekte kunnen veroorzaken. De mogelijkheid van betrokkenheid van testisweefsel moet dus worden geëvalueerd met gevoelige moleculaire methoden.

Gebaseerd op onze ervaring met detectie door RT-PCR van minimale residuele ziekte (MRD) bij neuroblastoom sinds 1994 [Tchirkov et al. 2003] en in de cryopreservatie van testisweefsel sinds 2012, willen we een specifieke en gevoelige methode ontwikkelen voor de detectie van restziekte door middel van RT-PCR om de tumorbesmetting van testiculair geoogst weefsel te evalueren.

Studiepopulatie: We kozen 3 modellen van pediatrische solide tumoren met een hoog risico op metastasen en die vaak steriliserende behandelingen (chemo en/of radiotherapie) vereisen: neuroblastoom, Ewing-tumor en alveolair rhabdosarcoom. We zullen vier tumorcellijnen gebruiken: IMR32 en SK-NSH voor neuroblastoom; RD-ES voor Ewing-tumor; RH-30 voor rabdosarcoom. We zijn van plan om 20 fragmenten per regel te gebruiken.

Onderzoeksduur: 12 maanden Onderzoeksopzet: Testiculair weefsel zonder bekende maligniteit maar met een aandoening die een biopsie (vruchtbaarheidsbeoordeling) rechtvaardigt, zal worden geoogst.

De geoogste testiculaire cortex zal worden behandeld om al het levensvatbare sperma te herstellen en vervolgens gebruiken we het resterende weefsel om te worden besmet met tumorcellijnen. Vervolgens zal detectie van het specifieke transcript worden gedaan door middel van RT-PCR in vers weefsel en na bevriezen/ontdooien. Totaal RNA zal worden geëxtraheerd met het TRI-reagens en qRT-PCR zal worden uitgevoerd met behulp van de "TaqMan"-technologie.

Primair eindpunt: een gevoeligheid bereiken van ongeveer 1/106 cellen.