Contaminação de Tecido Testicular por RT-PCR em Participantes com Tumores Sólidos (TESTIMAR)

Alguns tumores sólidos têm alto risco de localização metastática, inclusive nos testículos. Há preocupação com a possível presença de células malignas no tecido testicular que poderiam causar recorrência da doença primária após o reimplante. Assim, a possibilidade de envolvimento do tecido testicular precisa ser avaliada com métodos moleculares sensíveis.

Com base em nossa experiência na detecção por RT-PCR de doença residual mínima (DRM) em neuroblastoma desde 1994 [Tchirkov et al. 2003] e na criopreservação de tecido testicular desde 2012, queremos desenvolver um método específico e sensível para detecção de doença residual por RT-PCR, a fim de avaliar a contaminação tumoral do tecido testicular colhido.

População do estudo: Escolhemos 3 modelos de tumores sólidos pediátricos com alto risco de metástases e que frequentemente requerem tratamentos esterilizantes (quimioterapia e/ou radioterapia): neuroblastoma, tumor de Ewing e rabdossarcoma alveolar. Utilizaremos quatro linhagens de células tumorais: IMR32 e SK-NSH para neuroblastoma; RD-ES para tumor de Ewing; RH-30 para rabdossarcoma. Planejamos usar 20 fragmentos por linha.

Duração do estudo: 12 meses Desenho do estudo: O tecido testicular sem malignidade conhecida, mas com uma condição que justifique uma biópsia (avaliação de fertilidade) será colhido.

O córtex testicular colhido será tratado para recuperar todos os espermatozóides viáveis ​​e, em seguida, utilizamos o tecido remanescente para ser contaminado com linhas de células tumorais. Em seguida, a detecção do transcrito específico será feita por RT-PCR em tecido fresco e após congelamento/descongelamento. O RNA total será extraído com o TRI-reagente e qRT-PCR será realizado utilizando a tecnologia "TaqMan".

Endpoint primário: para atingir uma sensibilidade de cerca de 1/106 células.