Kontaminering av testikelvävnad med RT-PCR hos deltagare med solida tumörer (TESTIMAR)

Vissa solida tumörer har hög risk för metastaserande lokalisering inklusive i testiklarna. Det finns oro över den möjliga närvaron av maligna celler i testikelvävnad som kan orsaka ett återfall av den primära sjukdomen efter reimplantation. Således måste möjligheten av testikelvävnadsinblandning utvärderas med känsliga molekylära metoder.

Baserat på vår erfarenhet av detektion med RT-PCR av minimal restsjukdom (MRD) i neuroblastom sedan 1994 [Tchirkov et al. 2003] och inom kryokonservering av testikelvävnad sedan 2012, vill vi utveckla en specifik och känslig metod för att detektera kvarvarande sjukdomar med RT-PCR för att utvärdera tumörkontaminationen av testikelskördad vävnad.

Studiepopulation: Vi valde 3 modeller av pediatriska solida tumörer med hög risk för metastaser och som ofta kräver steriliserande behandlingar (kemoterapi och/eller strålbehandling): neuroblastom, Ewing-tumör och alveolär rhabdosarkom. Vi kommer att använda fyra tumörcellslinjer: IMR32 och SK-NSH för neuroblastom; RD-ES för Ewing-tumör; RH-30 för rhabdosarkom. Vi planerar att använda 20 fragment per rad.

Studiens längd: 12 månader Studiedesign: Testikelvävnad utan känd malignitet men med ett tillstånd som motiverar en biopsi (fertilitetsbedömning) kommer att skördas.

Den skördade testikelbarken kommer att behandlas för att återvinna alla livsdugliga spermier och sedan använder vi återstående vävnad för att kontamineras med tumörcellslinjer. Sedan kommer detektion av det specifika transkriptet att göras med RT-PCR i färsk vävnad och efter frysning/upptining. Totalt RNA kommer att extraheras med TRI-reagenset och qRT-PCR kommer att utföras med hjälp av "TaqMan"-teknologin.

Primär endpoint: att nå en känslighet omkring 1/106 celler.