Kontamination von Hodengewebe durch RT-PCR bei Teilnehmern mit soliden Tumoren (TESTIMAR)

Bei einigen soliden Tumoren besteht ein hohes Risiko einer metastatischen Lokalisierung, einschließlich in den Hoden. Es bestehen Bedenken hinsichtlich des möglichen Vorhandenseins bösartiger Zellen im Hodengewebe, die nach der Reimplantation zu einem Wiederauftreten der Primärerkrankung führen könnten. Daher muss die Möglichkeit einer Beteiligung des Hodengewebes mit sensitiven molekularen Methoden bewertet werden.

Basierend auf unserer Erfahrung beim Nachweis von minimaler Resterkrankung (MRD) durch RT-PCR bei Neuroblastomen seit 1994 [Tchirkov et al. 2003] und seit 2012 in der Kryokonservierung von Hodengewebe, wollen wir eine spezifische und sensitive Methode zum Nachweis von Resterkrankungen mittels RT-PCR entwickeln, um die Tumorkontamination von entnommenem Hodengewebe zu bewerten.

Studienpopulation: Wir wählten 3 Modelle pädiatrischer solider Tumore mit hohem Metastasierungsrisiko aus, die häufig sterilisierende Behandlungen (Chemo- und/oder Strahlentherapie) erfordern: Neuroblastom, Ewing-Tumor und alveoläres Rhabdosarkom. Wir werden vier Tumorzelllinien verwenden: IMR32 und SK-NSH für Neuroblastom; RD-ES für Ewing-Tumor; RH-30 für Rhabdosarkom. Wir planen, 20 Fragmente pro Zeile zu verwenden.

Studiendauer: 12 Monate Studiendesign: Hodengewebe ohne bekannte Malignität, aber mit einem Zustand, der eine Biopsie (Fruchtbarkeitsbeurteilung) rechtfertigt, wird entnommen.

Die geerntete Hodenrinde wird behandelt, um alle lebensfähigen Spermien zu gewinnen, und dann verwenden wir das verbleibende Gewebe, um es mit Tumorzelllinien zu kontaminieren. Anschließend erfolgt der Nachweis des spezifischen Transkripts durch RT-PCR in frischem Gewebe und nach Einfrieren/Auftauen. Die Gesamt-RNA wird mit dem TRI-Reagenz extrahiert und die qRT-PCR wird mit der „TaqMan“-Technologie durchgeführt.

Primärer Endpunkt: Erreichen einer Sensitivität von etwa 1/106 Zellen.