Contaminación de tejido testicular por RT-PCR en participantes con tumores sólidos (TESTIMAR)

Algunos tumores sólidos tienen un alto riesgo de localización metastásica incluso en los testículos. Existe preocupación por la posible presencia de células malignas en el tejido testicular que podrían causar una recurrencia de la enfermedad primaria después del reimplante. Por lo tanto, la posibilidad de afectación del tejido testicular debe evaluarse con métodos moleculares sensibles.

En base a nuestra experiencia en la detección por RT-PCR de enfermedad residual mínima (MRD) en neuroblastoma desde 1994 [Tchirkov et al. 2003] y en la criopreservación de tejido testicular desde 2012, queremos desarrollar un método específico y sensible para la detección de enfermedad residual por RT-PCR con el fin de evaluar la contaminación tumoral del tejido testicular recolectado.

Población de estudio: Elegimos 3 modelos de tumores sólidos pediátricos con alto riesgo de metástasis y que frecuentemente requieren tratamientos esterilizantes (quimio y/o radioterapia): neuroblastoma, tumor de Ewing y rabdosarcoma alveolar. Usaremos cuatro líneas de células tumorales: IMR32 y SK-NSH para neuroblastoma; RD-ES para tumor de Ewing; RH-30 para rabdosarcoma. Planeamos usar 20 fragmentos por línea.

Duración del estudio: 12 meses Diseño del estudio: Se recolectará tejido testicular sin malignidad conocida pero con una condición que justifique una biopsia (evaluación de fertilidad).

La corteza testicular recolectada se tratará para recuperar todos los espermatozoides viables y luego, usamos el tejido restante para contaminarlo con líneas de células tumorales. Luego, la detección del transcrito específico se realizará mediante RT-PCR en tejido fresco y después de la congelación/descongelación. El ARN total se extraerá con el reactivo TRI y se realizará qRT-PCR utilizando la tecnología "TaqMan".

Criterio de valoración principal: alcanzar una sensibilidad de aproximadamente 1/106 células.