Poziomy GCF HIF-1α, VEGF i TNF-α u pacjentów z G-AgP przed i po leczeniu periodontologicznym.

Badanie populacji i badanie kliniczne

Do niniejszego badania zrekrutowano łącznie 40 osób. Kryteria włączenia obejmowały: 1) wiek od 25 do 45 lat 2) osoby niepalące bez historii palenia 3) posiadające co najmniej 20 naturalnych zębów. Kryteria wykluczenia były następujące: 1) posiadanie jakichkolwiek rozpoznanych schorzeń, takich jak cukrzyca, choroby układu krążenia, reumatoidalne zapalenie stawów, choroby immunologiczne i skórno-śluzówkowe 2) stosowanie antybiotyków, niesteroidowych leków przeciwzapalnych i leków immunosupresyjnych w ciągu ostatnich 6 miesięcy 3 ) z jakąkolwiek niezapalną destrukcyjną chorobą przyzębia 4) niechirurgiczne/chirurgiczne leczenie periodontologiczne odbyte w ciągu ostatniego roku 5) wymagające leczenia odtwórczego i endodontycznego 6) posiadające aparaty ortodontyczne lub wyjmowaną protezę częściową 7) kobiety w ciąży/karmiące/po menopauzie.

Kliniczne badanie periodontologiczne całej jamy ustnej obejmowało pomiar głębokości zgłębnika (PPD), poziomu przyczepu klinicznego (CAL), obecności krwawienia przy sondowaniu (BOP), wskaźnika dziąseł (GI) i wskaźnika płytki nazębnej (PI) w 6 miejscach na ząb, z wyjątkiem trzecie zęby trzonowe. Obecność i rodzaj ubytku kości wyrostka zębodołowego oceniano na cyfrowym zdjęciu panoramicznym u każdego uczestnika, które w razie potrzeby uzupełniano o zdjęcia RTG okolicy wierzchołkowej.

Stan przyzębia każdego pacjenta był oceniany przez jednego skalibrowanego periodontologa za pomocą ręcznej sondy. Rozpoznanie G-AgP czyli stan zdrowia przyzębia ustalono zgodnie z Międzynarodową Klasyfikacją Chorób Przyzębia z 1999 roku. Pacjenci z grupy G-AgP (n=20) mieli co najmniej trzy zęby poza pierwszymi trzonowcami i siekaczami, wykazując CAL ≥5 mm i PPD ≥6 mm. Utrata kości w badaniu radiograficznym wynosiła ≥30% długości korzenia i dotyczyła ≥3 zębów innych niż pierwsze zęby trzonowe i siekacze. Ten ogólny wzorzec poważnego zniszczenia był niespójny z ilością osadów drobnoustrojów. Pacjenci mieli co najmniej jednego innego członka rodziny, u którego występowały lub miały w przeszłości poważne problemy z przyzębiem. Osoby zdrowe pod względem przyzębia (n=20) w grupie kontrolnej nie miały miejsc z PPD >3 mm i CAL >2 mm, a także nie miały radiograficznych cech utraty kości wyrostka zębodołowego. BOP wynosił <15% w całej jamie ustnej.

Leczenie

Zrekrutowani pacjenci G-AgP otrzymywali konwencjonalne skalowanie kwadrantowe i planowanie korzeni (SRP) w znieczuleniu miejscowym przez 3 tygodnie. SRP wykonywał ten sam periodontolog (inny niż badacz rejestrował parametry przyzębia) przy użyciu wkładek ultradźwiękowych i ręcznych kiret periodontologicznych. Ponowne oceny przeprowadzono po 1 i 3 miesiącach od zakończenia SRP w prawym dolnym kwadrancie. U zdrowych przyzębia nie przeprowadzono żadnej interwencji periodontologicznej.

Próbkowanie GCF

GCF pobrano z dwóch najgłębszych kieszonek zębów jednokorzeniowych na początku badania w grupie G-AgP bezpośrednio przed leczeniem prawego górnego kwadrantu. Pobieranie próbek powtórzono w tych samych miejscach po zakończeniu SRP w prawym dolnym kwadrancie. GCF pobrano z policzkowych aspektów dwóch niesąsiadujących miejsc międzyzębowych w zębach jednokorzeniowych z. Próbki pobrano z miejsc bez BOP w grupie zdrowych przyzębia. Standardowe paski bibuły filtracyjnej zastosowano do pobierania próbek GCF. Sterylne paski papieru delikatnie wsuwano w bruzdę dziąsłową lub kieszonkę aż do wyczucia lekkiego oporu i pozostawiono tam na 30 sekund. Objętość wchłoniętego płynu mierzono za pomocą wstępnie skalibrowanego urządzenia elektronicznego. Paski papieru przechowywano w temperaturze -40°C do dalszej analizy.

Pomiar poziomów HIF-1α, VEGF i TNF-α w GCF

Dwa paski bibuły połączono i umieszczono w 300 µl PBS-T (0,05%). Poziomy HIF-1α, VEGF i TNF-α w próbkach GCF mierzono za pomocą testu immunoenzymatycznego przy użyciu komercyjnych zestawów zgodnie z wytycznymi producenta. Wyniki GCF wyrażono jako obie całkowite ilości w dwóch miejscach na czas pobierania próbek.

Analiza statystyczna

Wszystkie analizy statystyczne przeprowadzono za pomocą standardowego pakietu oprogramowania statystycznego. Do porównań wewnątrzgrupowych, jeśli dane nie były normalnie zakłócone, zastosowano test Friedmana i test Dunna z poprawką Bonferroniego do analizy zmiany między wartością wyjściową a 1 miesiącem i 3 miesiącami po leczeniu. Dla porównań międzygrupowych, test U Manna-Whitneya dla danych normalnie i nienormalnie zaburzonych. Test korelacji rang Spearmana wykorzystano do wykrycia korelacji parametrów biochemicznych z parametrami klinicznymi i wzajemnymi w grupie chorych przed i po leczeniu. Wszystkie testy przeprowadzono na poziomie istotności P <0,05.