Geny zneuryzowane1 i RGS14

ASD jest chorobą neurologiczną rozpoczynającą się we wczesnych stadiach życia i charakteryzuje się zaburzeniami poznawczymi i behawioralnymi (Ansel i in., 2008; Alvares i in., 2020). Uważa się, że etiologia ASD wynika z czynników genetycznych, epigenetycznych i środowiskowych; jednak nie zostało to jeszcze ostatecznie wyjaśnione (Ito i in., 2017).

naszym celem była ocena różnic między poziomami ekspresji tych genów między ASD, HFA i zdrowymi kontrolami oraz rola tych genów w patogenezie ASD.

Metoda:

Do badania włączono pacjentów z ASD (n=20) i HFA (n=20) oraz zdrowych osób kontrolnych (n=20) zgodnych z wiekiem pacjentów. Dokonano oceny klinicznej pacjentów i dokonano klasyfikacji zgodnie z kryteriami diagnostycznymi DSM-IV.

Do izolacji RNA zastosowano zestaw High Pure RNA Isolation Kit (Roche Diagnostic, wersja 12, Niemcy). Syntezę cDNA przeprowadzono z tych RNA za pomocą zestawu ranscriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kit (Roche Diagnostics, GmbH, Mannheim).

qRT-PCR przeprowadzono przy użyciu zestawu LightCycler®480 Real Time Ready Assay Master Probe Kit (Roche Diagnostics, GmbH, Mannheim). Inkubację prowadzono z programem urządzenia PCR przez 10 minut w 95oC przez 45 cykli, przez 10 sekund w 95oC, i przez 60 sekund w 60oC. Wartości Ct uzyskano z programu Light Cycler 480 Software i oba geny analizowano oddzielnie. Porównawczą metodę CT (2-ΔΔCT) zastosowano do określenia względnej ilościowej oceny genów docelowych, znormalizowanych do genu metabolizmu podstawowego (β-aktyny).

Statystycznie:

Wyniki eksperymentów oceniono stosując R 3.1.1 (www.r-project.org). oraz testy chi-kwadrat, test U Manna-Whitneya, test H Kruskala-Wallisa. Poziom P<0,05 przyjęto jako istotny.