Glioblastoma: validação e comparação entre tumor primário e seu modelo murino (XENOGBM)

O projeto apresentado se concentrará na avaliação de uma abordagem multimodal comparando o GBM humano com amostras pareadas de xenoenxertos ortotópicos usando MRI e MRS de alta resolução e perfis moleculares multidimensionais.

20 pacientes com alta probabilidade de diagnóstico recente de GBM com base em ressonância magnética (3 Tesla (3T) ressonância magnética, T1, T2, T1 gadolínio, DWI e espectroscopia de ressonância magnética) serão identificados no CHUV antes de serem submetidos à ressecção neurocirúrgica. Os pacientes serão submetidos a um extenso exame radiológico experimental usando sequências de ressonância magnética específicas na ressonância magnética de 7 Tesla (7T) para identificar vias metabólicas específicas (ver abaixo, seção sobre imagens). Posteriormente, os pacientes serão submetidos à ressecção neurocirúrgica segura máxima de seus tumores. A porção do tumor que não for utilizada para fins diagnósticos será coletada imediatamente para uso posterior (ver abaixo, seção sobre avaliações moleculares). Após a ressecção, os pacientes serão submetidos ao tratamento padrão [geralmente radioquimioterapia combinada, ou será oferecida a participação em um ensaio clínico. Os parâmetros clínicos serão coletados, incluindo características histopatológicas e a evolução e padrão de crescimento do tumor residual (se presente), ou o desenvolvimento de recorrências será posteriormente comparado com os parâmetros e evolução dos modelos de xenoenxerto.

Em alta intensidade de campo magnético (7T), alta relação sinal-ruído e maior dispersão espectral permitem medições mais confiáveis ​​de um grande número de metabólitos usando Espectroscopia de Ressonância Magnética em comparação com intensidades de campo clínicas disponíveis (3T e abaixo). Além disso, os autores desenvolveram uma sequência de espectroscopia de voxel único (SVS) de tempo de eco curto de sensibilidade total "ESPECIAL semi-adiabático"(2) que foi implementada, validada em 7T e permite a quantificação de 15 metabólitos com alta precisão, incluindo N -acetilaspartato(NAA), glutamina(Gln), glutamato(Glu), mio-inositol(Ins), fosforiletanolamina(PE), colina total(tCho), creatina, fosfocreatina, N-acetilaspartilglutamato(NAAG), lactato(Lac), glutationa (GSH), aspartato (Asp), taurina (Tau), cilo-inositol e ácido γ-aminobutírico (GABA). Esta técnica de localização foi estendida a uma técnica de MR Spectroscopic Imaging (MRSI) em 7T, que permite o mapeamento das distribuições espaciais de metabólitos cerebrais. Além disso, a glicina é um possível marcador de malignidade tumoral e sua detecção in vivo foi estabelecida em nosso estudo anterior usando TE=30ms com sequência ESPECIAL em 7T. Portanto, neste estudo serão utilizadas as técnicas supracitadas para obtenção das informações neuroquímicas e sua distribuição espacial no glioblastoma dos pacientes. Esses dados serão posteriormente comparados com as informações neuroquímicas obtidas nos xenoenxertos ortotópicos no cérebro de camundongos derivados do respectivo paciente com glioblastoma.

Todas as medições MRS de pacientes com glioblastoma serão realizadas em um scanner 7T MR com uma bobina de cabeça de recepção de canal CP Transmit / 32. Com base nas imagens ponderadas em T1 de alta resolução obtidas com a sequência MP2RAGE, o Volume de Interesse (VOI) para espectroscopia será colocado de acordo com a localização do glioblastoma. O tempo total de aquisição do MRS será de 30 min. Os espectros de MRS in vivo serão pós-processados ​​e as concentrações de metabólitos serão quantificadas para criar mapas de metabólitos.

Investigações moleculares e funcionais de amostras pareadas de glioblastoma primário e respectivos xenoenxertos ortotópicos em camundongos

O objetivo do presente estudo é determinar as propriedades moleculares, histopatológicas e funcionais, incluindo padrões de crescimento como invasividade, do GBM original e os respectivos xenoenxertos ortotópicos derivados no camundongo, e vinculá-los aos parâmetros de imagem/metabolismo obtidos por alta ressonância magnética de resolução.

Amostras de GBM de pacientes coletadas na cirurgia serão divididas em 2 partes, (i) congeladas para análises moleculares e (ii) cultivadas sob condições de células-tronco para subsequente transplante estereotáxico em camundongos machos imunocomprometidos e estabelecimento de linhas esféricas.